Пкт 10 расшифровка: Предохранитель ПКТ 103-10-100-12,5 У3 — ООО «Смартснаб»

Предохранитель ПКТ 103-10-100-12,5 У3 — ООО «Смартснаб»

Предохранитель ПКТ 103-10-100-12,5 У3 применяется для защиты силовых трансформаторов, воздушных и кабельных линий, в сетях трехфазного переменного тока частоты 50 и 60 Гц. Предохранитель состоит из двух контактов, двух опорных изоляторов и одного сдвоенного патрона (плавкой вставки). Расшифровка маркировки ПКТ 103-10-100-12,5 У3: П — предохранитель; К — с кварцевым наполнителем; Т — для силовых трансформаторов; 1 — однополюсный; 03 — конструктивное исполнение контакта; 10 — номинальное напряжение в киловольтах; 100 — номинальный ток предохранителя в амперах; 12,5 — номинальный ток отсечки в килоамперах; У — климатическое исполнение; 3 — категория размещения.

Габаритные, установочные и присоединительные размеры предохранителей ПКТ 101,102,103 (исполнение УЗ)

Высоковольтные предохранители

Обозначение

В обозначении предохранителей указывают: их тип (ПК — с мелкозернистым кварцевым наполнителем), назначение (Т — для защиты силовых трансформаторов, К — конденсаторов, Д — электродвигателей, Н — трансформаторов напряжения), конструктивное исполнение (101 — для предохранителей с номинальным током до 32 А, 102 — для предохранителей напряжением 6 кВ и током от 40 до 80 А, 10 кВ и от 40 до 50 А, 103 — для предохранителей 6 кВ и от 100 до 160 А, 10 кВ и от 80 до 100 А), номинальное напряжение, кВ, номинальный ток, А (он равен току плавкой вставки), номинальный ток отключения, кА, климатическое исполнение и категорию размещения. Например, предохранитель с мелкозернистым кварцевым наполнителем, предназначенный для защиты силового трансформатора, конструктивного исполнения 102, на номинальные напряжение 10 кВ, ток 40 А и ток отключения 20 кА, для размещения в умеренном климате и внутренней установки обозначают ПКТ 102-10-40-20У3.
Для мачтовых трансформаторных подстанций применяют предохранители ПКТ соответствующего климатического исполнения (У, ХЛ, Т) и 1-й категории размещения. Их патроны выполняют водонепроницаемыми во избежание отсыревания внутренних частей.
Для защиты измерительных трансформаторов напряжения на напряжение 3 -10кВ применяют предохранители ПKH-10, не имеющие указательного устройства об их срабатывании.

В предохранителях ПК плавкую вставку изготовляют из нескольких параллельных проволок, что значительно улучшает условия теплоотдачи и уменьшает общее сечение вставки. В результате этого улучшаются условия охлаждения и гашения электрической дуги, которая возникает в нескольких параллельных каналах при плавлении и испарении проволок, что влечет к разрыву электрической цепи. Кроме того, на проволоки плавких вставок напаяны оловянные шарики 13, служащие для снижения температуры плавления проволок за счет «металлургического эффекта». Так как температура плавления олова значительно ниже температуры плавления материала вставки, оно плавится раньше и в расплавленном виде проникает в металл проволоки, снижая тем самым на этом участке температуру плавления вставки предохранителя.
Патрон предохранителя ПК необходимо заполнять сухим, чистым мелкозернистым песком с содержанием кварца около 99%, что обеспечивает быструю деионизацию электрической дуги в пространстве между зернами кварца и проникновение паров металла вставки в песок.
Предохранители ПК допускают многократную перезарядку дугогасящего патрона после его срабатывания, при этом спекшийся кварцевый заполнитель заменяют. При замене плавкой вставки следует точно соблюдать длину проволоки, соответствующую данному типу предохранителя, а также расстояние между отдельными проволоками и стенками патрона. Несоблюдение длины проволоки и расстояний приводят к разрушению предохранителя. Трубки с плавкими предохранителями герметически запаивают.
Предохранитель ПК является токоограничивающим защитным аппаратом, так как ток короткого замыкания обрывается после расплавления и испарения металла не в момент его естественного прохождения через нулевое значение, а значительно раньше, чем он успевает достигнуть своего максимального значения.
Предохранители для внутренней установки снабжены указателем срабатывания 12, который состоит из металлической втулки, пружины, указательной проволоки 11 и головки с крючком. Втулка со вставленной в нее пружиной закреплена на крышке патрона. Один конец пружины прикреплен к головке указателя крючком, а другой присоединен к втулке. В нормальном рабочем состоянии пружина сжата. При перегорании плавкой вставки перегорает и указательная проволока, освобождая пружину, которая выбрасывается вместе с головкой из предохранителя, по чему судят о том, что вставка предохранителя перегорела.
Наибольшая отключаемая мощность предохранителей ПК составляет 300 MBА. Они выпускаются на следующие номинальные токи: 2; 3,2; 5; 8; 10; 16; 20; 31,5; 40; 50; 80; 100; 160; 200; 315; 400 А.

Конструктивно предохранители, изготовленные на разные номинальные напряжения, отличаются длиной патрона, а на разные номинальные токи — не только длиной патрона, но и диаметрами патронов и колпачков. При номинальном напряжении 6 кВ на номинальный ток 75 А и выше и при напряжении 10 кВ на ток 50 А и выше патроны предохранителей делают спаренными. Предохранители на токи выше 200 А при напряжении 6 кВ и выше 150 А при напряжении 10 кВ имеют по четыре патрона на каждую фразу.

Высоковольтные предохранители ПКТ

 Электротехника > Предохранители > Высоковольтные предохранители ПКТ

Высоковольтные предохранители ПКТ предназначены для защиты силовых трансформаторов, воздушных и кабельных линий.

Предохранители ПКТ с кварцевым наполнителем являются токоограничивающими. Отключение тока короткого замыкания в предохранителях с кварцевым песком обеспечивается за счет интенсивной деионизации дуги, возникающей на месте пролегания плавкой вставки, в узких щелях между песчинками наполнителя. Срабатывание патрона определяется в предохранителях ПКТ 101, ПКТ 102, ПКТ 103 и ПКТ 104 по указателю срабатывания, выдвигающемуся наружу под воздействием пружины после перегорания нихромовой проволоки.

Предохранитель ПКТ 101, ПКТ 102, ПКТ 103, ПКТ 104 является комплектом, который состоит из следующих элементов и поставляется в разобранном виде:

?  патрон (заменяемый элемент) ПН, ПТ 1.1, ПТ 1.2, ПТ 1.3, ПТ 1.4 – 1 шт.

?  контакт (др. названия: губка, пинцет) К01, К02, К03, К04 – 2 шт.

?  опорный изолятор ИО-6-3,75, ИО-10-3,75, ОНС-10-300 – 2 шт (изоляторы устанавливаются на специальном цоколе или непосредственно на элементах конструкции распределительного устройства).

Не допускается применение предохранителей ПКТ в сетях с напряжением, меньшим номинального напряжения предохранителя. Маркировка патрона наносится на середину фарфоровой трубки, маркировка изолятора наносится на боковую поверхность, маркировка контактов наносится на поверхность стальной планки контакта. Маркировка выполняется аппликационными этикетками.

Расшифровка условного обозначения предохранителей ПКТ 101, ПКТ 102, ПКТ 103 и ПКТ 104 в качестве примера приведена для предохранителя ПКТ 101-10-16-20 У1:

?  П — предохранитель;

?  К — с кварцевым наполнителем;

?  Т — для силовых трансформаторов;

?  1 — однополюсный, с указателем срабатывания;

?  01 — конструктивное исполнение контакта;

?  10 — номинальное напряжение в киловольтах;

?  16 — номинальный ток предохранителя в амперах;

?  20 — номинальный ток отключения в килоамперах;

?  У— климатическое исполнение;

?  1 — категория размещения.

Предохранители ПКТ:

ПКТ, предохранитель ПКТ, патрон пкт,пкт, патроны ПТ, пкт, высоковольтные предохранители ПКТ, патрон ПКТ, ПКТ-10, ПКТ-6, ПКТ 101, ПКТ 102, ПКТ 103

Предохранитель ПКТ 101-10-2-12,5 У3                 Предохранитель ПКТ 101-6-16-40 У1                               

Предохранитель ПКТ 101-10-2-31,5 У3                 Предохранитель ПКТ 101-6-16-40 У3 

Предохранитель ПКТ 101-10-3,2-12,5 У3              Предохранитель ПКТ 101-6-20-20 У3     

Предохранитель ПКТ 101-10-3,2-31,5 У3              Предохранитель ПКТ 101-6-20-40 У1       

Предохранитель ПКТ 101-10-5-12,5 У3                 Предохранитель ПКТ 101-6-20-40 У3         

Предохранитель ПКТ 101-10-5-31,5 У3                 Предохранитель ПКТ 101-6-31,5-20 У3            

Предохранитель ПКТ 101-10-8-12,5 У3                  Предохранитель ПКТ 101-6-31,5-20 У1          

Предохранитель ПКТ 101-10-8-31,5 У3                  Предохранитель ПКТ 101-3-2-31,5 У3

Предохранитель ПКТ 101-10-10-12,5 У3                Предохранитель ПКТ 101-3-2-40 У3    

Предохранитель ПКТ 101-10-10-20 У1                   Предохранитель ПКТ 101-3-3,2-31,5 У3   

Предохранитель ПКТ 101-10-10-31,5 У3                Предохранитель ПКТ 101-3-3,2-40 У3            

Предохранитель ПКТ 101-10-16-12,5 У3                Предохранитель ПКТ 101-3-5-31,5 У3                

Предохранитель ПКТ 101-10-16-20 У1                   Предохранитель ПКТ 101-3-5-40 У3    

Предохранитель ПКТ 101-10-16-31,5 У3                Предохранитель ПКТ 101-3-8-31,5 У3       

Предохранитель ПКТ 101-10-20-12,5 У3                Предохранитель ПКТ 101-3-8-40 У3     

Предохранитель ПКТ 101-10-20-20 У1                   Предохранитель ПКТ 101-3-10-31,5 У3         

Предохранитель ПКТ 101-10-20-31,5 У3                Предохранитель ПКТ 101-3-10-40 У3       

Предохранитель ПКТ 101-10-31,5-12,5 У3             Предохранитель ПКТ 101-3-16-31,5 У3      

Предохранитель ПКТ 101-10-31,5-12,5 У1              Предохранитель ПКТ 101-3-16-40 У3        

Предохранитель ПКТ 101-6-2-20 У3                        Предохранитель ПКТ 101-3-20-31,5 У3              

Предохранитель ПКТ 101-6-2-40 У3                        Предохранитель ПКТ 101-3-20-31,5 У3               

Предохранитель ПКТ 101-6-3,2-20 У3                     Предохранитель ПКТ 101-3-20-40 У3

Предохранитель ПКТ 101-6-3,2-40 У1                     Предохранитель ПКТ 101-3-31,5-31,5 У3                 

Предохранитель ПКТ 101-6-2-40 У1                         Предохранитель ПКТ 101-3-31,5-40 У3         

Предохранитель ПКТ 101-6-3,2-40 У3                      Предохранитель ПКТ 102-10-31,5-31,5 У3            

Предохранитель ПКТ 101-6-5-20 У3                         Предохранитель ПКТ 102-10-40-31,5 У3               

Предохранитель ПКТ 101-6-5-40 У1                         Предохранитель ПКТ 102-10-50-12,5 У3            

Предохранитель ПКТ 101-6-5-40 У3                         Предохранитель ПКТ 102-6-31,5-31,5 У3  

Предохранитель ПКТ 101-6-8-20 У3                         Предохранитель ПКТ 102-6-40-31,5 У3      

Предохранитель ПКТ 101-6-8-40 У1                         Предохранитель ПКТ 102-6-50-31,5 У3   

Предохранитель ПКТ 101-6-8-40 У3                         Предохранитель ПКТ 102-6-80-20 У3          

Предохранитель ПКТ 101-6-10-20 У3                       Предохранитель ПКТ 103-10-50-31,5 У3     

Предохранитель ПКТ 101-6-10-40 У1                       Предохранитель ПКТ 103-10-80-20 У3 

Предохранитель ПКТ 101-6-10-40 У3                       Предохранитель ПКТ 103-10-100-12,5 У3          

Предохранитель ПКТ 101-6-10-40 У3                       Предохранитель ПКТ 103-6-80-31,5 У3                     

Предохранитель ПКТ 101-6-16-20 У3                        Предохранитель ПКТ 103-6-100-31,5 У3

                                                                                           Предохранитель ПКТ 103-6-160-20 У3

       Предохранители  высоковольтные токоограничивающие серий ПКТ101, ПКТ102, ПКТ103 и ПКТ104  предназначены для защиты силовых трансформаторов, воздушных и кабельных линий, в сетях трехфазного переменного тока частоты 50 и 60 Гц с номинальным напряжением от 3 до 35 кВ и рабочими токами от 2 до 400 А.
Климатическое исполнение У, категории размещения 1 и 3 по ГОСТ 15150-69. Высоковольтные предохранители ПКТ 101-10-(2;3,2;5;8;10;16;20;31,5А)-ХХХ У3 предназначены для защиты силовых трансформаторов, воздушных и кабельных линий на номинальное напряжение 10 кВ.

Расшифровка условного обозначения высоковольтный предохранителей
серий ПКТ101, ПКТ102, ПКТ103 и ПКТ104 на 3, 6, 10, 20, 35 кВ климатического исполнения У1, УЗ:

Например: ПКТ101-10-16-20 У1:П — предохранитель; К — с кварцевым наполнителем; Т — для силовых трансформаторов; 1 — однополюсный, с указателем срабатывания; 01 — конструктивное исполнение контакта; 10 — номинальное напряжение в киловольтах; 16 — номинальный ток предохранителя в амперах; 20 — номинальный ток отключения в килоамперах; У — климатическое исполнение;1 — категория размещения.

 Предохранители ПКТ 101-10-(2;3,2;5;8;10;16;20;31,5А)-ХХХ У3с кварцевым наполнителем являются токоограничивающими. Отключение тока короткого замыкания в предохранителях с кварцевым песком обеспечивается за счет интенсивной деионизации дуги, возникающей на месте пролегания плавкой вставки, в узких щелях между песчинками наполнителя.

Высоковольтный предохранитель ПКТ 101-10-(2;3,2;5;8;10;16;20;31,5А)-ХХХ У3 является комплектом, который состоит из следующих элементов и поставляется в разобранном виде: — Патрон  ПТ 1.1-10 -(2;3,2;5;8;10;16;20;31,5А)-ХХХ У3 — Контакт  К01-10 У3 — 2 шт. — Опорный изолятор ИО-10-3,75 I — 2 шт
Высоковольтные предохранители ПКТ 102-10-(31,5;40;50А)-ХХХ У3 предназначены для защиты силовых трансформаторов, воздушных и кабельных линий на номинальное напряжение 10 кВ.
Предохранители ПКТ 102-10-(31,5;40;50А)-ХХХ У3 с кварцевым наполнителем являются токоограничивающими. Отключение тока короткого замыкания в предохранителях с кварцевым песком обеспечивается за счет интенсивной деионизации дуги, возникающей на месте пролегания плавкой вставки, в узких щелях между песчинками наполнителя.
Высоковольтные предохранители ПКТ 102-6-(31,5;40;50А)-ХХХ У3 предназначены для защиты силовых трансформаторов, воздушных и кабельных линий на номинальное напряжение 6 кВ. Предохранители ПКТ 102-6-(31,5;40;50А)-ХХХ У3 с кварцевым наполнителем являются токоограничивающими. Отключение тока короткого замыкания в предохранителях с кварцевым песком обеспечивается за счет интенсивной деионизации дуги, возникающей на месте пролегания плавкой вставки, в узких щелях между песчинками наполнителя.

Высоковольтные предохранители ПКТ 103-6-(80;100;160А)-ХХХ У3 предназначены для защиты силовых трансформаторов, воздушных и кабельных линий на номинальное напряжение 6 кВ.

Предохранители ПКТ 103-6-(80;100;160А)-ХХХ У3 с кварцевым наполнителем являются токоограничивающими. Отключение тока короткого замыкания в предохранителях с кварцевым песком обеспечивается за счет интенсивной деионизации дуги, возникающей на месте пролегания плавкой вставки, в узких щелях между песчинками наполнителя.

Высоковольтный предохранитель ПКТ 103-6-(80;100;160А)-ХХХ У3 является комплектом, который состоит из следующих элементов и поставляется в разобранном виде:

— Патрон  ПТ 1.3-6-(80;100;160А)-ХХХ У3 — 1 шт.

— Контакт К03-10 У3 — 2 шт.

— Опорный изолятор ИО-6-3,75 I — 2 шт

Высоковольтные предохранители ПКТ 103-10-(80;100;160А)-ХХХ У3 предназначены для защиты силовых трансформаторов, воздушных и кабельных линий на номинальное напряжение 10 кВ.

Предохранители ПКТ 103-10-(80;100;160А)-ХХХ У3 с кварцевым наполнителем являются токоограничивающими. Отключение тока короткого замыкания в предохранителях с кварцевым песком обеспечивается за счет интенсивной деионизации дуги, возникающей на месте пролегания плавкой вставки, в узких щелях между песчинками наполнителя.

Высоковольтный предохранитель ПКТ 103-10-(80;100;160А)-ХХХ У3 является комплектом, который состоит из следующих элементов и поставляется в разобранном виде:

— Патрон (заменяемый элемент) ПТ 1.3-10-(80;100;160А)-ХХХ У3 — 1 шт.

— Контакт (др. названия: губка, пинцет) К03-10 У3 — 2 шт.

— Опорный изолятор ИО-10-3,75 I — 2 шт

Предохранители ПТ являются заменяемыми частями предохранителя ПКТ!

 

Предохранители серии ПКТ

Предохранители ПКТ  рассчитаны  для защиты силовых трансформаторов, линий электропередач от перегрузок и токов коротких замыканий в трехфазных сетях напряжением до 10 кВ. ПКТ в комбинации с выключателями нагрузки способны заменять дорогостоящие силовые выключатели.

В настоящий момент можно изготовить  более 150 вариаций предохранителей серии ПКТ, вот некоторые из них :
ПКТ 101-3-8-31,5-У3; ПКТ 101-3-5-31,5-У3; ПКТ 101-3-3,2-31,5-У3; ПКТ 101-3-2-31,5-У3; ПКТ 101-3-10-31,5-У3; ПКТ 101-3-16-31,5-У3; ПКТ 102-6-31,5-31,5-У3; ПКТ 102-6-40-31,5-У3; ПКТ 102-6-50-31,5-У3; ПКТ 102-6-80-20-У3; ПКТ 102-10-31,5-31,5-У3; ПКТ 102-10-40-31,5-У3; ПКТ 102-10-50-12,5-У3; ПКТ 103-6-100-31,5-У3; ПКТ 103-6-160-20-У3; ПКТ 103-10-50-31,5-У3; ПКТ 104-6-160-31,5-У3; ПКТ 104-6-200-31,5-У3; ПКТ 104-10-100-31,5-У3; ПТ 1.1-6-2- 40 УЗ; ПТ 1.1-6-3,2- 40 УЗ; ПТ 1.1-6-5- 40 УЗ; ПТ 1.1-6-8- 40 УЗ; ПТ 1.1-10-2- 31,5 УЗ; ПТ 1.1-10-3,2- 31,5 УЗ; ПТ 1.1-10- 5- 31,5 УЗ; ПТ 1.1-35-2-8 У3; ПТ 1.1-35-3,2-8 У3; ПТ 1.1-35-5-8 У3.

Преимущества:

• Быстродействие относительно других защитных устройств
• Способность отключать большие токи короткого замыкания с существенным ограничением их максимального значения
• Патроны предохранителя могут выпускаться как с указателем срабатывания и ударным устройством, так и без них
• Корпус патрона предохранителя изготовлен из высококачественного термоустойчивого фарфора, покрытого влагонепроницаемой глазурью
• Колпаки патрона предохранителя изготовлены из электротехнической меди с гальваническим покрытием (оловянирование), обеспечивая высокие показатели
• Наполнитель патрона предохранителя, кварцевый песок высокой степени очистки, обеспечивает эффективное гашение электрической дуги внутри предохранителя при его срабатывании

Соответствие стандартам:

Условные обозначения:
ПКТ-Х₁-Х₂-Х₃-Х₄-У3

Купить предохранители серии ПКТ

Расшифровка обозначений предохранителей серии пкт устройство и работа

   Предохранители состоят из одного или двух патронов, вставляемых в контакты, которые укреплены на опорных изоляторах. Изоляторы устанавливаются на специальном цоколе или непосредственно на элементах конструкции распределительного устройства.

   Предохранители ПКТ 101 категории размещения 1 отличаются от предохранителей этих же категории размещения 3 формой опорных изоляторов и наличием в патроне дополнительных деталей, герметизирующих внутреннюю полость патрона.

    Предохранители с кварцевым наполнителем являются токоограничивающими.

   Отключение тока короткого замыкания в предохранителях с кварцевым песком обеспечивается за счет интенсивной деионизации дуги, возникающей на месте пролегания плавкой вставки, в узких щелях между песчинками наполнителя.

   Срабатывание патрона определяется в предохранителях ПКТ 101, ПКТ 102, ПКТ 103 и ПКТ 104 по указателю срабатывания, выдвигающемуся наружу под воздействием пружины после перегорания нихромовой проволоки.

Габаритные, установочные и присоединительные размеры предохранителей

 ПКТ 101, ПКТ 102, ПКТ 103,  ПКТ 104

1 — патрон; 2 — контакт; 3 — изолятор; а — два болта 

Высоковольтные предохранители 10 кв: описание, характеристики, размеры, применение

Технические характеристики предохранителей ПКТ, ПКН

Конструкционные особенности

Разъединитель предохранителей и его эквивалентный конкурент

Главным конкурентом плавкого предохранителя является автомат защиты, отличительной чертой которого является простота в использовании.

Недостатки

• Возможность использования только один раз.
• Большим недостатком плавких предохранителей является конструкция, дающая возможность шунтирования, то есть использования «жучков», приводящих к пожарам.
• Возможность необоснованной замены на предохранитель номиналом выше.
• Возможный перекос фаз в трёхфазных электроцепях при больших токах.
• В цепях трёхфазных электродвигателей при сгорании одного предохранителя инициируется пропадание одной фазы, что может привести к выходу из строя электродвигателя (рекомендуется использовать реле контроля фаз).

Преимущества

• В асимметричных трёхфазных цепях при аварии на одной фазе, питание пропадёт только на одной фазе, а остальные две фазы продолжат дальше снабжать нагрузку (не рекомендуется такое практиковать при больших токах, так как это может привести к перекосу фаз и высоким токам по нулевому рабочему проводнику)
• Из-за медленной скорости срабатывания, плавкие предохранители можно использовать для селективности.
• Так же селективность самих плавких предохранителей относительно друг друга (при последовательном соединении) имеют более простой расчёт селективности, нежели у автоматического предохранителя: номинальные токи последовательно соединённых предохранителей должны отличаться друг от друга в 1,6 раз или больше.
• Из-за более простой конструкции чем у автомата защиты, почти исключена возможность т. н. «поломки механизма» — в случае аварийной ситуации предохранитель полноценно обесточит цепь.
• После замены плавкой вставки предохранителя в цепи получается защита с характеристиками, заявленными производителем в отличие от случая с использования автоматического выключателя с подгорающими контактами.

Создание индикатора перегорания

На рынке есть специальные предохранители, которые предназначаются для автомобилей. Они оборудованы индикатором неисправности. Непосредственно в корпусе устройства установлена маленькая лампа накаливания или же светодиод. Индикация начинается тогда, когда происходит перегорание предохранителя. Такое устройство можно сделать и самостоятельно.

Чтобы это выполнить, необходимо подключить через параллельное соединение к контактам защитного устройства какой-либо светодиод. Делать это нужно через миниатюрную лампочку, которая должна работать от напряжения в 12 вольт. Также можно применять токоограничивающий резистор.

Индикатор устанавливается непосредственно в корпусе или же сбоку, на колодке держателя. Лучше выбирать второй вариант, потому что во время замены отсекающего устройства сам индикатор не нужно будет перемещать. Следует помнить, что он не будет гореть при испорченном предохранителе, если к нему не подведена нагрузка.

Индикация может работать и на устройствах, функционирующих от бытовой электрической сети в 220 вольт. Для этого необходимо использовать резистор со значениями сопротивления до 500 кОм. Также, чтобы защитить светодиод, нужно в схему добавить любой диод, который рассчитан на обратное напряжение со значениями от 300 вольт. В этом случае отлично подходит устройство от отечественного производителя КД109Б.

Гашение дуги в корпусах предохранителей

Простейшие модели не содержат внутри ничего, кроме воздуха. Но и рассчитаны они на небольшие токи, отключение которых не сопровождается образованием дуги с опасными для электрооборудования характеристиками. При расплавлении вставки она гаснет самостоятельно.

С повышением тока, отключаемого предохранителем, возникает необходимость принудительного гашения дуги внутри корпуса. Иначе она не погаснет, продолжая подпитывать короткое замыкание. Аварийная цепь не будет отключена: дуга, расплавив контактную систему, распылит частицы металла по поверхности корпуса, образовав контактный мостик. По нему продолжит протекать ток короткого замыкания, пока не сработает вышестоящая защита, либо окончательно не расплавятся токопроводы. В лучшем случае время отключения аварийного режима работы затянется в разы.

Чем больше время отключения короткого замыкания, тем больше вреда оно принесет

Поэтому гашению дуги внутри предохранителя уделяют особое внимание

Первым методом, позволяющим сократить время отключения короткого замыкания, было изготовление центральной части полого корпуса предохранителя из фибры. Это слоистый материал, состоящий из картона, спрессованного с целлюлозной массой, предварительно пропитанной хлористым цинком. Изделия из фибры стойки к воздействиям бензина, спирта, керосина, ацетона, а также обладают изоляционными свойствами.

Фибровые предохранители

Но главное достоинство деталей из фибры, обусловившее ее распространение в электротехнике – при воздействии пламени дуги она выделяет смесь газов, блокирующих процесс ее горения. Газы, смешиваясь с ионизированной плазмой дуги, затрудняют движение заряженных частиц в ней. Сопротивление токопроводящего канала резко возрастает, дуга гаснет. Такие предохранители называют газогенерирующими, а кроме фибры для их изготовления используется еще и винипласт.

Устройство фибрового предохранителя

Следующим способом, применяемым для ускорения работы предохранителя, является заполнение корпуса кварцевым песком. Температура плавления кварца – около 1700 градусов, к тому же он – отличный диэлектрик. При перегорании плавкой вставки дуга, увеличиваясь в объеме, распространяется между песчинками. Ей приходится их обходить по замысловатой и сложной траектории, в результате длина ее увеличивается. Дополнительно происходит отбор тепла дуги материалом наполнителя, что способствует деионизации канала и скорейшему погасанию разряда.

Кварцевые предохранители

Кварцевые предохранители получили наибольшее распространение в электроустановках и применяются до сих пор. Газогенерирующие предохранители распространены меньше и встречаются только в устаревших распределительных устройствах.

Как подобрать предохранитель ПКТ зная параметры транформатора?

Предохранители высоковольтные серии ПК, ПКТ, ПКН

Устройство серии ПК относят к токоограничивающему предохранительному оборудованию и имеет простой принцип работы. Изделие состоит из патрона в виде фарфоровой трубки, внутри которой находится кварцевый песок.

Внутри патрона находится плавка вставка. На концах патрона с двух сторон закреплены колпачки из латуни с крышками. Контакты предохранителя находятся на опорных изоляторах на специальной стальной плите.

Каждый из двух контактов оснащен замком, который удерживает патрон от выпадения в случае возникновения электродинамических усилий. Плавкая вставка представляет собой несколько проводником из меди, покрытых серебряным напылением. Эти провода намотаны на сердечник из керамических материалов. Вставка расположена внутри трубки.

Предохранители серии ПКТ чаще всего применяются для обеспечения защиты силовых трансформаторов и электрических линий. Элемент представляет собой два контакта, два опорных изолятора, а также патрон из фарфора либо стекла. Внутри патрона также находится кварцевый песок.

Модели из серии ПКН нужны для использования в измерительных цепях любых трансформаторов в линиях городского или промышленного электроснабжения.

Сфера использования этой аппаратуры:

• системы централизации;
• блокировки и сигнализации на железных дорогах.

Устройство аналогично моделям других серий.

Высоковольтные предохранители

Применение предохранителей для защиты электроустановок высокого напряжения значительно упрощает и удешевляет их конструкцию. Альтернативой этому является устройство полноценной релейной защиты. А для ее работы требуются датчики: трансформаторы тока и трансформаторы напряжения. Их задача – снизить измеряемые величины до безопасных значений, с которыми могут работать реле и микропроцессорные терминалы. Все это в совокупности оказывается на порядки дороже, чем установка предохранителей.

Но к быстродействию предохранителей в электроустановках выше 1000 В предъявляются еще более жесткие требования. Для скорейшего отключения их плавкую вставку прикрепляют к пружине, соединенной с одним из контактных выводов. Корпус заполняется кварцевым песком.

При перегорании вставки пружина освобождается и резко сокращается. За счет этого длина участка горения дуги быстро увеличивается. Гашение происходит быстрее.

Высоковольтные предохранители

Дополнительным и обязательным для высоковольтных предохранителей устройством является узел контроля исправности. Чтобы безопасно проверить низковольтный предохранитель, можно воспользоваться индикатором, указателем напряжения или тестером. При необходимости можно отключить рубильник и измерить сопротивление между контактами защитного устройства.

Но проверить исправность высоковольтного предохранителя так не получится. Приближаться к нему нельзя. Использование указателей напряжения не дает достоверных результатов. Если плавкими вставками защищен силовой трансформатор, указатель покажет за перегоревшим предохранителем напряжение, наведенное на потерявшей питание обмотке с обмоток других фаз. При проверке исправности вставок на кабельной линии указатель засветится от остаточного заряда, сохраняющегося из-за большой емкости кабеля.

Для индикации срабатывания защиты из корпуса предохранителя выскакивает индикатор, хорошо видимый на расстоянии, безопасном для осмотра. На низковольтных предохранителях для удобства обслуживания тоже применяются индикаторные устройства, сигнализирующие о перегорании плавкой вставки.

Другой проблемой, существующей при использовании предохранителей в сетях выше 1000 В, является возникновение неполнофазного режима из-за перегорании вставки в одной фазе. Оставшиеся в работе на двух фазах силовые трансформаторы выдают на низковольтной обмотке несимметричное напряжение, грозящее вывести из строя электроприборы потребителей.

Устройство высоковольтного предохранителя

Если проблема актуальна, при перегорании одной вставки отключают питание полностью. Для этого используют специальные предохранители с бойками на одном из его торцов. Боек подпружинен и освобождается одновременно с перегоранием плавкой вставки. В паре с такими устройствами применяются выключатели нагрузки, имеющие отключающие планки. Во включенном положении контактная система выключателя удерживается защелкой. При ударе бойка по отключающей планке защелка выбивается. Система отключающих пружин выключателя отбрасывает его контактную систему в отключенное положение. По выскочившему из корпусу бойку определяют фазу, из-за замыкания в которой произошло отключение.

Плавкая вставка

Предохранители этой конструкции имеют в своем составе токопроводящий элемент, который под действием тока с величиной, превышающей номинальное установленное значение, расплавляется от перегрева и испаряется. Этим обеспечивается снятие напряжения со схемы и защита ее.

Плавкие вставки могут быть изготовлены из металлов, например, меди, свинца, железа, цинка или отдельных сплавов, обладающих таким коэффициентом термического расширения, который обеспечивает защитные свойства электрооборудования.

Работа плавкой вставки под расчетной нагрузкой обеспечивается созданием надежного баланса температур между теплом, выделяемым на металле от прохождения по нему рабочего электрического тока, и отводом тепла в окружающую среду за счет рассеивания.

При возникновении аварийных режимов это равновесие быстро нарушается. Металлическая часть плавкой вставки при нагреве увеличивает значение своего активного сопротивления. Это вызывает больший разогрев, поскольку выделяемое тепло прямо пропорционально величине I2R. При этом снова возрастает сопротивление и выделение тепла. Процесс продолжается лавинообразно до тех пор, пока не наступает расплавление, закипание и механическое разрушение плавкой вставки.

   Виды предохранителей, плавкая вставка

Основным эксплуатационным параметром плавкой вставки является его времятоковая характеристика, определяющая зависимость кратности аварийного тока (относительно номинального значения) ко времени срабатывания.

Для ускорения работы плавкой вставки при малых кратностях аварийных токов используются специальные технические приемы:

Изменение сечения

На сужениях пластин увеличивается сопротивление и создается большее выделение тепла. В нормальном режиме работы эта энергия успевает равномерно распространиться по всей поверхности, а при перегрузках создаются критические зоны на узких местах. Их температура быстро достигает состояния, при котором металл плавится и разрывает электрическую цепь.

Для увеличения быстродействия пластины делают из тонкой фольги и применяют их в несколько слоев, включенных параллельно. Перегорание любого участка на одном из слоев ускоряет срабатывание защиты.

Принцип металлургического эффекта

Он основан на свойстве отдельных легкоплавких металлов, например, свинца или олова, растворять в своей структуре более тугоплавкие медь, серебро и отдельные сплавы.

Для этого на многожильные проволочки, из которых делают плавкую вставку, наносят капли олова. При допустимой температуре металла проводов эти добавки не создают никакого эффекта, но в аварийном режиме они быстро расплавляются, растворяют часть основного металла и обеспечивают ускорение срабатывания предохранителя.

Эффективность этого способа проявляется только на тонких проводниках и значительно снижается при увеличении их поперечного сечения.

Основной недостаток плавкой вставки состоит в том, что при срабатывании ее необходимо вручную заменять новой. Для этого требуется поддерживать их запас.

Пограничные и предельно отключаемые токи

Есть плавкие вставки у высоковольтного оборудования, которые будут перегорать в момент, когда будет достигнута их предельная температура. Чаще всего такие защитные устройства называют пограничными. Естественно, что если пограничный ток будет близок по значению к номинальному или чуть больше его, то в таком случае плавкий элемент способен нормально работать при своих показателях.

Есть еще один важный параметр, который называют предельным отключаемым током. В данном случае речь идет о максимальной величине тока, которую способен отключить выбранный плавкий элемент.

Тут важно знать, что данное значение должно быть либо равно, либо чуть больше по значению, чем максимально возможный ток короткого замыкания в защищаемой цепи. Если же выбрать предохранитель неверно по этому параметру, то длительность горения дуги может быть слишком большой, что приведет к разрушению патрона уже самого прибора, а не только плавкого элемента

Номинальный ток и особенности предохранителя

Здесь стоит сказать о том, что у прибора имеется номинальный ток плавкого элемента, а есть номинальный ток самого предохранителя. В первом случае имеется в виду значение тока, при котором он не расплавит вставку. Во втором же случае имеются в виду токи, которые сможет выдержать токоведущая часть устройства. Данные значения чаще всего указываются на самих деталях, то есть на токоведущих частях, а также на контактных частых вставки.

Есть несколько основных показателей, которым должен соответствовать высоковольтный предохранитель. Сюда относят стабильность, надежность и избирательность. Если с первыми двумя требованиями все ясно, то вот под избирательностью имеется в виду то, что плавкий элемент должен длительный период времени работать под номинальной нагрузкой, он не должен отключать приборы при кратковременной перегрузке, которая часто возникает при включении оборудования, к примеру. Должно быть надежное отключение цепи во время сильной перегрузки и при этом не должен быть разрушен корпус самого предохранителя. Кроме того, где бы не возник ток короткого замыкания, устройство должно отключать лишь тот участок, за который оно отвечает. Обычно в таких случаях первым должен сработать тот прибор, который находится ближе всего к месту аварийной перегрузки.

Токоограничивающий предохранитель

Те устройства, которые способны резко понизить силу тока в цепи, если происходит короткое замыкание, получили название токоограничивающих. Во время того, как через данную плавкую вставку начинает проходить слишком высокий ток, который возникает только во время короткого замыкания, или же происходит длительная перегрузка повышенным током, она начинает плавиться. Сначала она переходит в жидкое, а после уже в газообразное состояние. В момент плавки данной металлической вставки у предохранителя высоковольтного на 10 кВ будет образовываться дуга, впрочем как и в любом другом схожем устройстве.

Длительность горения данной дуги, а также время, требуемое на ее гашение внутри предохранителя, будут зависеть от конструкции самого устройства, а также от типа плавкой вставки. Только после того, как дуга полностью погаснет, произойдет окончательный разрыв цепи.

Устройство элемента

Сетевые электропредохранители применяются не только в электронике, но и в системах электросети. Любой тип конструкции имеет три составные части:

• Корпус.
• Контакты.
• Непосредственно плавкий элемент, благодаря которому функционирует устройство.

Плавкий элемент — это материал, проводящий электрический ток, который выполнен из легкоплавкого сплава. Этот проводник имеет определённое электрическое сопротивление, из-за чего происходит выделение тепла во время прохождения по нему тока. Если значение ниже предусмотренного характеристиками, то температуры будет недостаточно для того, чтобы проволока расплавилась. Назначение и типы устройств плавких предохранителей могут быть разными.

Когда значение превышает номинальный порог срабатывания, плавкий элемент расплавляется, что ведёт за собой разрыв цепи. Скорость этого процесса обусловливается силой тока, проходящего через проводник. По маркировке предохранителя можно понять, какие характеристики были заданы заводом во время производства. Это позволит определить время, через которое сработает аварийное отключение при определённом показателе нагрузки. Такая информация необходима людям, проектирующим защитное оборудование.

Корпус предназначается не только для соединения элемента в устройстве. Во время срабатывания часто может появиться электрическая дуга. Корпус выполняет задачу по её гашению. Контакты необходимы для подсоединения защитного оборудования к элементам, через которые подаётся электричество на электроустановки. Чем больше площадь самого контакта, тем меньше вероятность, что произойдёт нагрев на соединении. Зачастую они выполнены из меди или латуни со специальным анодированным покрытием.

Полупроводниковые предохранителя

Развитие силовой полупроводниковой техники обозначило еще одну проблему. Ни одно механическое защитное устройство, включая плавкие предохранители, не способно своевременно отключить аварийный режим работы устройств, содержащих мощные диоды или транзисторы. Перегрузка этих приборов возможна лишь ограниченное время – десятки миллисекунд. При превышении этого времени прибор разрушается.

Полупроводниковый предохранитель

Чтобы свести к минимуму повреждения электроники в частотных преобразователях, инверторах или устройствах плавного пуска применяют полупроводниковые предохранители. Их p-n-переход перегорает быстрее, чем любая плавкая вставка. Но есть у них особенность – срабатывая, полупроводниковый предохранитель не дает полной гарантии разъединения цепи. Ток через нее прекращается, но не полностью: перегоревший полупроводниковый предохранитель имеет некоторое сопротивление. Поэтому для безопасной эксплуатации перед ним устанавливают еще один коммутационный элемент – автоматический выключатель. Они осуществляет резервирование полупроводниковой защиты, а также используется для гарантированного снятия напряжения с устройства для проверки исправности или замены предохранителей.

Почему в микроволновке часто перегорает высоковольтный предохранитель

Одна из причин выхода из строя СВЧ-печей – это разрушение или перегорание ВВ-предохранителей. Это происходит при работе бытового прибора в нештатных режимах.

Очень часто люди по незнанию оставляют в тарелке металлические предметы или запускают пустую печь. Все это приводит к тому, что высоковольтная часть сгорает.

Предохранитель должен не только разорвать цепь, но сделать это быстро и на большом расстоянии. Это необходимо, чтобы исключить дуговой разряд.

При перегорании предохранителя необходимо заменить элемент на аналогичный. Есть мнение, то возможна замена на обычный, но соответствующий по допустимым току и напряжению элемент. Однако лучше этого не делать.

Электрические характеристики и габаритные размеры патронов.

Плавкие предохранители являются наиболее распространенным средством защиты электрических присоединений (кабельных и воздушных) и машин от перегрузки и тока короткого замыкания. Основными местами установки и применения плавких предохранителей являются электрические щиты и сборки различного напряжения, защита различных силовых и измерительных трансформаторов (например, трансформаторов напряжения типа НТМИ, НКФ) со стороны высокого напряжения. Широко используются предохранители в сетях от 0,4 до 35 кВ в сетях однофазного и трехфазного переменного тока частоты 50 и 60 Гц, постоянного тока различного напряжения.

Для любого типа предохранителей основным элементом является плавкая вставка-патрон предохранителя, которая включается последовательно в цепь защищаемого устройства. Также в состав конструкции предохранителя входит корпус из изолирующего материала и контактная часть для установки и закрепления предохранителя в цепи. Устанавливаются предохранители в специальных контактах на изоляторах.

Для всех типов предохранителей, представленных у нас, наполнителем  является кварцевый песок (содержание оксида кремния — не менее 98 %, влажность не выше 3 %). Предварительно песок просушивается при 120—180 °С, его зерна имеют отличные характеристики теплопроводности и большую охлаждающую поверхность. Электрическая дуга горит в узком канале, между зернами песка. При больших токах КЗ вольт-амперная характеристика растет, ток резко уменьшается и электрическое устройство защищается от пробоя изоляции и повреждений.

По типам предохранителей различают несколько вариантов, соответственно классам напряжения. Для электроустановок до 1000 В применяются предохранители типа ПН-2 и ПН-0,1. Свыше 1000 В  — предохранители высоковольтные ПКТ (П — предохранитель, К — с кварцевым наполнителем, Т —защита трансформаторов), в состав которых входят патроны ПКТ с фарфоровым корпусом и латунными колпаками, они предназначены для защиты трансформаторов (3—10 кВ) с высокой стороны. Наполнитель — кварцевый песок, плавкий элемент из медной или нихромовой (предохранители ПКН).

Применение предохранителей высоковольтных ПКТ  возможно в районах с умеренным климатом (климатическое исполнение «У» по категории 1 в исполнении У1) и умеренно-холодным климатом в исполнении УХЛ (УХЛЗ), что удовлетворяют требованиям нормативных документов.
Срабатывание предохранителей типа ПКТ и их патронов ПТ основано на плавлении калиброванной проволоки при прохождении через нее силы тока больше номинального значения. С увеличением значения тока уменьшается время плавления проволоки (вставки).

Электрическая дуга в высоковольтных предохранителях, при этом, гасится в пространстве между зернами кварцевого песка. При коротком замыкании величина тока большая и вставка плавится за время меньше полупериода частоты, потому  ток КЗ не успевает достигнуть своего максимального значения, этим самым патроны предохранителей ПКТ выполняют токоограничивающую функцию в условиях отключения короткого замыкания.

Типы предохранителей СВЧ

В микроволновой печи есть целых три разных типа предохранителя — это сетевой и два высоковольтных.

Высоковольтный предохранитель для СВЧ-печи служит защитой для такого элемента, как магнетрон. Это высоковольтный трансформатор, который и нуждается в защите

Сам же защитный элемент располагается конструктивно рядом с ним, но при этом, если обратить внимание на схему, можно заметить, что он размыкает цепь между входом и выходом из высоковольтного блока

Что касается второго предохранителя аналогичного типа, то он имеется только у тех СВЧ-печей, которые обладают электронной панелью управления. При этом такая панель должна быть питаться от небольшого трансформатора малой мощности. Он будет заниматься преобразованием электрического тока домашней сети в напряжение, которое требуется для работы панели.

Оцените статью:

% PDF-1.3
%
452 0 obj>
эндобдж

xref
452 130
0000000016 00000 н.
0000005338 00000 п.
0000002896 00000 н.
0000005477 00000 н.
0000005605 00000 н.
0000005795 00000 н.
0000005915 00000 н.
0000006017 00000 н.
0000007925 00000 н.
0000009707 00000 н.
0000010100 00000 п.
0000010517 00000 п.
0000010859 00000 п.
0000011208 00000 п.
0000012896 00000 п.
0000014631 00000 п.
0000016450 00000 п.
0000018227 00000 п.
0000018833 00000 п.
0000019131 00000 п.
0000020933 00000 п.
0000022840 00000 п.
0000025776 00000 п.
0000028955 00000 п.
0000031042 00000 п.
0000031142 00000 п.
0000031213 00000 п.
0000031408 00000 п.
0000031487 00000 п.
0000031567 00000 п.
0000031615 00000 п.
0000031771 00000 п.
0000031819 00000 п.
0000031915 00000 п.
0000032002 00000 н.
0000032165 00000 п.
0000032213 00000 п.
0000032313 00000 п.
0000032403 00000 п.
0000032547 00000 п.
0000032595 00000 п.
0000032703 00000 п.
0000032820 00000 н.
0000032964 00000 н.
0000033012 00000 п.
0000033138 00000 п.
0000033256 00000 п.
0000033474 00000 п.
0000033522 00000 п.
0000033629 00000 п.
0000033714 00000 п.
0000033857 00000 п.
0000033905 00000 п.
0000034010 00000 п.
0000034120 00000 п.
0000034215 00000 п.
0000034262 00000 п.
0000034350 00000 п.
0000034397 00000 п.
0000034494 00000 п.
0000034541 00000 п.
0000034636 00000 п.
0000034683 00000 п.
0000034730 00000 п.
0000034835 00000 п.
0000034882 00000 п.
0000035024 00000 п.
0000035071 00000 п.
0000035185 00000 п.
0000035232 00000 п.
0000035356 00000 п.
0000035403 00000 п.
0000035450 00000 п.
0000035497 00000 п.
0000035594 00000 п.
0000035642 00000 п.
0000035690 00000 п.
0000035738 00000 п.
0000035849 00000 п.
0000035897 00000 п.
0000036001 00000 п.
0000036049 00000 п.
0000036190 00000 п.
0000036238 00000 п.
0000036403 00000 п.
0000036451 00000 п.
0000036579 00000 п.
0000036627 00000 н.
0000036675 00000 п.
0000036723 00000 п.
0000036855 00000 п.
0000036903 00000 п.
0000037035 00000 п.
0000037083 00000 п.
0000037200 00000 н.
0000037248 00000 п.
0000037364 00000 п.
0000037412 00000 п.
0000037540 00000 п.
0000037588 00000 п.
0000037722 00000 п.
0000037770 00000 п.
0000037894 00000 п.
0000037942 00000 п.
0000037990 00000 н.
0000038038 00000 п.
0000038086 00000 п.
0000038134 00000 п.
0000038258 00000 п.
0000038306 00000 п.
0000038411 00000 п.
0000038459 00000 п.
0000038563 00000 п.
0000038611 00000 п.
0000038710 00000 п.
0000038758 00000 п.
0000038854 00000 п.
0000038902 00000 п.
0000039011 00000 п.
0000039059 00000 н.
0000039154 00000 п.
0000039202 00000 п.
0000039302 00000 п.
0000039350 00000 п.
0000039455 00000 п.
0000039503 00000 п.
0000039629 00000 н.
0000039677 00000 п.
0000039725 00000 п.
0000039773 00000 п.
трейлер
] >>
startxref
0
%% EOF

454 0 obj> поток
xW {PSW? 7 @ rAPkal`H
8 `i5 @@» @ Bou $ h) K; vgϽ7; _ {gr9d

Транскрипционный анализ плазмиды pCT Chlamydia trachomatis идентифицирует регулируемые во времени транскрипты, антисмысловую РНК и промоторы, выбранные σ70

Последовательный анализ паттернов экспрессии транскриптов улучшает прогноз выживаемости при множественном раке | BMC Cancer

Последовательное профилирование t-SNE

Дополнительный рис.1 суммирует нашу предыдущую работу [13] относительно степени, в которой кластеризация транскриптов из 15 путей с установленной ролью при раке с помощью t-SNE [14, 16, 17, 18] может быть использована для прогнозирования долгосрочных различий в выживаемости среди всех групп. 34 типа рака, представляющих 10 227 отдельных опухолей из TCGA [9, 12, 13]. В качестве примера, анализ 514 светлоклеточных карцином почек (KIRC) с 23 транскриптами, составляющими путь биосинтеза пиримидина, позволил получить два отдельных кластера t-SNE, содержащих почти идентичное количество опухолей и связанных с очень значимыми различиями медианы выживаемости (2090 дней против> 4500 дней, P = 5,6 × 10 ^{— 7} , рис. 1a и b и исх. [13]. Аналогичный анализ, проведенный на тех же опухолях с 30 транскриптами, составляющими Notch Pathway, также дал два отдельных кластера t-SNE, связанных со значительными различиями в выживаемости (1912 дней против 3554 дней, P = 7,0 × 10 ^{— 4} , рис. . 1c и d).

Рис. 1

Последовательный анализ t-SNE KIRC и LGG. а . Генерируемые t-SNE образцы транскриптов пути биосинтеза пиримидина опухоли KIRC, показывающие два различных кластера.n = количество опухолей в каждой группе b . Кривые выживаемости Каплана-Мейера групп пациентов, соответствующих кластерам опухолей в A. M = медиана выживаемости (в днях) каждой из групп. с . t-SNE-паттерны транскриптов Notch Pathway. д . Кривые выживаемости Каплана-Мейера групп пациентов, соответствующих кластерам опухолей в C. и . Выживание по Каплану-Мейеру в кластере благоприятного выживания Notch Pathway из D после анализа t-SNE с использованием транскриптов из пути биосинтеза пиримидина.Наблюдались два кластера t-SNE, подобные тем, что изображены на A (не показаны). ф . Выживание по Каплану-Мейеру в кластере Notch Pathway для неблагоприятного выживания из D. g . Генерируемые t-SNE паттерны транскриптов LGG Notch Pathway демонстрируют два различных кластера. ч . Кривые выживаемости Каплана-Мейера для каждой из групп пациентов, соответствующие кластерам опухолей на (G). и . Генерируемые t-SNE образцы транскриптов пути LGG Wnt, показывающие четыре различных кластера. Дж . Кривые выживаемости Каплана-Мейера для каждой из групп пациентов, соответствующие кластерам опухолей в (I). к . Последовательная кластеризация t-SNE. Благоприятная выживаемость опухолей t-SNE Wnt Cluster 1 из фиг. 1i была повторно проанализирована с использованием транскриптов Notch Pathway, которые генерировали ожидаемые два кластера t-SNE (не показаны) со значительными различиями в выживаемости. ( л ). Опухоли кластера 2 с неблагоприятной выживаемостью из рис. 1i были аналогичным образом повторно проанализированы с использованием транскриптов Notch Pathway, и было показано, что они состоят из двух субкластеров со значительными различиями в долгосрочном выживании

Тот факт, что вышеуказанные группы оставались гетерогенными после t -Оценка на основе SNE показала, что последовательный анализ с транскриптами из второго пути может еще больше разграничить группы.Поэтому мы повторно проанализировали опухоли из двух кластеров t-SNE пути Notch, показанных на рис. 1c и d, с транскриптами пути биосинтеза пиримидина. Эти результаты (Fig. 1e и f) показали, что каждый кластер t-SNE пути Notch Pathway может быть далее разделен на отдельные кластеры t-SNE пути биосинтеза пиримидина. В частности, исходная благоприятная выживаемость Notch Pathway Cluster 1 (медиана = 3554 дня, рис. 1d) теперь, как было показано, состоит из еще более благоприятной группы со средней выживаемостью> 4500 дней и значительно более неблагоприятной группы (средняя выживаемость = 2386 дней). , P = 5.9 × 10 ^{— 5} , рис. 1д). Эта последняя группа была сопоставима по своей выживаемости с каждой из групп краткосрочной выживаемости, первоначально очерченных с помощью одного анализа t-SNE ( P > 0,05 в каждом случае). Аналогичным образом, анализ исходной неблагоприятной выживаемости Notch Pathway Cluster 2 (медиана = 1912 дней, рис. 1d) также выявил два кластера со значительными различиями в выживаемости (медиана = 3615 дней против 1661 дня, P = 0,023, рис. 1f). .

Затем мы проанализировали 511 глиом низкой степени злокачественности, используя аналогичный последовательный подход.Первоначальное профилирование t-SNE с транскриптами пути Notch выявило два отдельных кластера со значительными средними различиями в долгосрочном выживании (3978 дней против 1891 дня, рис. 1g и h, P = 3,0 × 10 ^{— 4} ). Анализ тех же опухолей с использованием 25 транскриптов пути Wnt дал четыре отдельных кластера t-SNE (рис. 1i). Из них индивидуумы кластера 1 выжили дольше по сравнению с кластерами 2 и 3 (медиана выживаемости = 3200 дней против 1915 дней и 2433 дней, соответственно, P = 2.0 × 10 ^{— 4} в каждом случае.

Кластеры 1 и 2 каждый содержали достаточно большую популяцию опухолей, чтобы можно было провести значимый второй анализ с транскриптами из Notch Pathway. В случае кластера 1 Wnt это привело к ожидаемым двум кластерам t-SNE, аналогичным показанным на рис. 1g (не показано), со значительными различиями в их средней долгосрочной выживаемости (4695 дней по сравнению с 1933 днями, P ). = 4,1 × 10 ^{— 5} , рис. 1к). Аналогичный последовательный анализ выживаемости неблагоприятного пути Wnt в кластере 2 из рис.1i также продуцировали два кластера t-SNE Notch Pathway со значительно различающейся длительной выживаемостью — 4084 дня и 1547 дней (рис. 1l, P = 0,01). Сравнение каждой из благоприятных и неблагоприятных популяций на рис. 1k и l показало значительные различия в медиане выживаемости (4695 дней против 4084 дней, P = 0,0034 и 1933 дня против 1547 дней, P = 0,008) как а также значительные различия в выживаемости по сравнению с наиболее и наименее благоприятной выживаемостью, полученной с использованием только одного анализа t-SNE (напр.4695 дней против 3978 дней [рис. 1h], P = 0,01 и 1547 дней против 1891 дня [Рис. 1h, P = 0,04]). Таким образом, в отличие от KIRC, где второй анализ t-SNE позволил дополнительно разделить группы на дополнительные благоприятные или неблагоприятные долгосрочные когорты выживания, ни одна из которых не выжила значительно дольше или короче, чем те, которые проанализированы с помощью только одного анализа t-SNE, Последовательное профилирование LGG по t-SNE действительно выявило подгруппы пациентов с особенно благоприятной или неблагоприятной выживаемостью, которая намного превышала прогнозируемую на основе индивидуального анализа t-SNE.

Чтобы обобщить эти результаты, мы выполнили аналогичное последовательное профилирование t-SNE на саркомах (SARC) и почечно-папиллярно-клеточной карциноме почек (KIRP) (рис. 2). В первом случае 259 сарком были проанализированы с помощью t-SNE на предмет дифференциальных паттернов экспрессии транскриптов, содержащих пути Myc и TGF-β. Профилирование Myc Pathway выявило два кластера t-SNE с очень значимыми различиями в средней выживаемости (1536 дней [кластер 1] против 2599 дней [кластер 2], P = 0,0038, рис.2а и б). Профилирование пути TGF-β также выявило два кластера со средней выживаемостью 1649 дней (кластер 1) и> 4500 дней (кластер 2), P = 0,047, рис. 2c и d). Последовательное профилирование t-SNE нижнего кластера выживаемости пути TGF-β с транскриптами пути Myc позволило разделить его на две группы со средней выживаемостью 1262 дня и 2464 дня, P = 0,005, рис. 2e). Точно так же кластер 2 t-SNE пути TGF-β, включающий 83 человека с превосходной средней выживаемостью (> 4250 дней, рис.2г), также можно разделить на две группы. Однако, скорее всего, из-за того, что в этой группе не было достаточно большого количества опухолей, две кривые выживаемости не были определены как существенно различающиеся, несмотря на четкую тенденцию в этом направлении (средняя выживаемость 2324 дня против> 4500 дней).

Рис. 2

Последовательный анализ t-SNE SARC и KIRP. а . Генерируемые t-SNE образцы транскриптов SARC Myc Pathway демонстрируют два различных кластера. б . Кривые выживания Каплана-Мейера для каждого из кластеров tSNE, изображенных на рисунке A. с . t-SNE анализ транскриптов пути SARC TGF-β. д . Кривые выживаемости Каплана-Мейера пациентов из каждого кластера показаны в C. e . Кривые Каплана-Мейера пациентов из кластера неблагоприятного выживания TGF-β Pathway из C после анализа t-SNE с транскриптами Myc Pathway. Были сгенерированы два кластера t-SNE, подобные тем, что изображены в A (не показаны). Ф . Выживаемость по Каплану-Мейеру пациентов из кластера благоприятного выживания TGF-β Pathway, показанного на C, после анализа t-SNE с транскриптами Myc Pathway.Были созданы две группы t-SNE, подобные тем, которые показаны в A (не показаны). г . Анализ t-SNE транскриптов пути клеточного цикла KIRP показывает два основных опухолевых кластера и третий, состоящий только из семи опухолей. ч . Кривые выживаемости Каплана-Мейера пациентов из кластеров 1 и 2, изображенные в G. i . Генерируемые t-SNE паттерны транскриптов пентозофосфатного пути KIRP, показывающие два основных кластера. j Кривые выживаемости Каплана-Мейера для каждого из пациентов из кластеров опухолей, изображенных на I. к . Кривые Каплана-Мейера индивидуумов из кластера неблагоприятного выживания пентозофосфатного пути из I после анализа t-SNE с использованием транскриптов из пути клеточного цикла. Были сгенерированы два кластера t-SNE, подобные тем, что изображены в A (не показаны). л . Кривые Каплана-Мейера индивидуумов из кластера благоприятного выживания пентозофосфатного пути из K после анализа t-SNE с использованием транскриптов из Myc Pathway. Были сгенерированы два кластера t-SNE, подобные тем, которые изображены в A (не показаны)

Аналогичным образом профилирование t-SNE 288 KIRP с использованием 15 транскриптов, составляющих путь клеточного цикла [13], также сгенерировало два основных кластера, состоящих из почти идентичных количество опухолей.Третий кластер t-SNE, состоящий только из семи опухолей, в дальнейшем не анализировался (рис. 2g). Между первыми двумя группами наблюдались очень значимые различия в выживаемости (медиана выживаемости> 3900 дней [кластер 1] по сравнению с 2624 днями [кластер 2], P = 3,39 × 10 ^{— 5} ). Профилирование t-SNE этой же популяции опухолей с использованием 11 транскриптов, составляющих пентозофосфатный путь [13], также дало два отдельных кластера (рис. 2i) с пограничными различиями в долгосрочном выживании (каждый> 3900 дней, P = 0.048, рис. 2j).

Как и раньше, значительные улучшения в прогнозе выживаемости были достигнуты, когда указанные выше образцы опухолей подвергались последовательному анализу t-SNE. Таким образом, когда кластер 1 пентозофосфатного пути низкой выживаемости (рис. 2i и j) был проанализирован на предмет паттернов экспрессии транскриптов пути клеточного цикла, были получены два кластера t-SNE со значительно разными долгосрочными различиями в средней выживаемости (1498 дней по сравнению с .> 3000 сут, P = 2,2 × 10 ^{— 5} , рис.2к). Среднее время выживания менее благоприятной группы 1498 дней было значительно короче, чем у любой из менее благоприятных групп из кластеров t-SNE пути клеточного цикла и пентозофосфатного пути [1498 дней против 2624 дней, P = 0,05 (рис. 2h). ) и> 5900 дней, P = 0,01 (рис. 2j)]. Последовательное профилирование t-SNE на благоприятную выживаемость кластера 2 пентозофосфатного пути (рис. 2i и j) с транскриптами пути клеточного цикла не продемонстрировало значительных различий в среднем времени выживания между двумя полученными группами из-за, скорее всего, ограничений количества образцов и / или ограничения по времени выживания.Тем не менее, наблюдалась четкая тенденция: 87% особей «благоприятной группы» ( n = 88) оставались в живых через ~ 3000 дней по сравнению с только 55% особей «неблагополучной группы» ( n = 70) (рис. . 2l).

Наконец, мы провели третий анализ рака яичников (OV) и тела матки (UCEC), профили t-SNE которых были несколько более сложными и показали менее выраженные межкластерные различия в выживаемости при опросе с транскриптами отдельных путей.Например, рак яичников генерировал четыре кластера t-SNE с транскриптами пути биосинтеза пиримидина (рис. 3a). Из них только кластеры 1 и 4 показали даже пограничные значимые различия в их средней долгосрочной выживаемости (1492 дня против 1336 дней, P = 0,05, рис. 3b). Анализ тех же опухолей с использованием транскриптов клеточного цикла также дал четыре отдельных кластера t-SNE (рис. 3c), при этом только кластеры 2 и 4 продемонстрировали умеренно значимые различия в медиане выживаемости (1484 дня по сравнению с1187 дней, P = 0,034).

Рис. 3

Последовательный анализ t-SNE OV и UCEC. а . Генерируемые t-SNE образцы транскриптов пути биосинтеза пиримидина, показывающие четыре опухолевых кластера OV. б . Кривые выживаемости Каплана-Мейера пациентов из каждого кластера, изображенные в A. c . Генерируемые t-SNE образцы транскриптов пути клеточного цикла OV. д . Кривые выживаемости Каплана-Мейера пациентов из каждого кластера, показанные на C. и . Кривые выживаемости Каплана-Мейера пациентов из кластера 3 пути клеточного цикла с неблагоприятной выживаемостью из С после повторного анализа t-SNE с использованием транскриптов пути биосинтеза пиримидина. Были сформированы четыре кластера t-SNE, подобные тем, которые изображены в A (не показаны), причем два из них (кластеры 2 и 4) показали значительные различия в выживаемости. ф . Путь клеточного цикла благоприятного выживания. Кластер 2 t-SNE из (D) анализировали с помощью транскриптов пути биосинтеза пиримидина.Из них кластер 1 (средняя выживаемость 1736 дней) имел более благоприятную долгосрочную выживаемость, чем кластер 3 (1336 дней) или кластер 4 (1213 дней) ( P = 0,017 и P = 0,004, соответственно. g . Генерируемые t-SNE образцы транскриптов пути UCEC Myc. h . Выживаемость по Каплану-Мейеру пациентов из групп, представленных в G. (I). Образцы транскриптов пути UCEC Wnt, генерируемые t-SNE. j . Кривые выживаемости Каплана-Мейера пациентов из каждой из групп, изображенных на I. к . Кривые выживаемости Каплана-Мейера для индивидуумов из кластера 2 t-SNE пути благоприятного выживания пути Wnt после последующего профилирования t-SNE с транскриптами пути Myc. л . Кривые выживаемости Каплана-Мейера пациентов из когорты кластера 1 пути Wnt Pathway с неблагоприятной выживаемостью в K после повторного профилирования t-SNE с транскриптами Myc Pathway

Мы последовательно профилировали кластер 3 пути клеточного цикла (медиана выживаемости 1341 день, рис. 3c) с пиримидином Транскрипты пути биосинтеза.Из-за небольшого размера исходного кластера 3 пути клеточного цикла (37 опухолей) и того факта, что его вторичный анализ дал четыре кластера пути биосинтеза пиримидина, было трудно достичь высокой степени статистической значимости среди четырех групп. Тем не менее, кластеры 2 и 4 показали значительные различия в средней выживаемости (1946 дней против 1341 дня, соответственно, P = 0,02, рис. 3e). Гораздо более крупный кластер 2 из 161 клеточного цикла (средняя выживаемость 1484 дня, рис.3d) также можно разделить на четыре кластера путей биосинтеза пиримидина со значительными различиями в средней выживаемости между некоторыми группами (рис. 3f). Например, кластер 1 (средняя выживаемость 1736 дней) показал значительно большую выживаемость по сравнению с кластером 3 (1336 дней, P = 0,017) и кластером 4 (1213 дней, P = 0,004).

t-SNE-профили транскриптов Myc Pathway, примененные к 547 UCEC, сгенерировали три отдельных кластера (рис. 3G), причем кластер 3 продемонстрировал явную худшую медианную выживаемость (3112 дней) по сравнению с двумя другими кластерами [каждый> 4000 дней, P = 9.0 × 10 ^{— 4} (кластер 1) и 1,0 × 10 ^{— 4} (кластер 2) соответственно]. Профилирование с помощью транскриптов пути Wnt сгенерировало четыре кластера (рис. 3i), причем кластер 1 имел более низкую медианную выживаемость (3423 дня) по сравнению с кластерами 2 и 3 (> 3000 и> 3900 дней, P = 0,043 и P = 0,008. соответственно, рис. 3j) и кластер 3 демонстрирует более длительную выживаемость по сравнению с кластером 4 (P = 0,04).

Несмотря на благоприятную 82% долгосрочную выживаемость индивидов кластера 2 пути Wnt (рис.3j), они могут быть дополнительно разделены на ожидаемые три кластера после последовательного анализа с транскриптами Myc Pathway (не показаны). Хотя медиана выживаемости этих кластеров не могла быть определена, кластер 3, который содержал приблизительно одну лиману особей, показал значительно худшую выживаемость по сравнению с двумя другими кластерами ( P = 0,007, рис. 3k). Точно так же подразделение кластера 1 Wnt t-SNE с плохой выживаемостью (рис. 3j) с использованием транскриптов Myc Pathway идентифицировало одну подгруппу (кластер 3, рис.3l) с особенно низкой средней выживаемостью (3112 дней) по сравнению с двумя другими кластерами ( P = 0,034 и P = 0,037, соответственно).

Таким образом, в итоге последовательное использование t-SNE для подклассификации паттернов экспрессии транскриптов из выбранных путей, связанных с раком, позволило проанализировать несколько типов опухолей, чтобы достичь более высокой степени стратификации выживаемости, чем можно было бы достичь. только с одним анализом t-SNE. Таким образом, даже после первоначального анализа единственного пути опухолевые когорты оставались гетерогенными в отношении их кумулятивной долгосрочной выживаемости.

Последовательная иерархическая кластеризация / профилирование t-SNE

Многочисленные исследования показали, что в остальном гистологически схожие опухоли могут, тем не менее, демонстрировать явные различия в своих транскриптомах, которые коррелируют с выживаемостью и / или другим поведением [19,20,21,22,23,24 ]. Недавно мы показали для некоторых видов рака, что способность прогнозировать выживаемость с использованием этого подхода может быть улучшена в сочетании с профилированием t-SNE [13]. Мы решили расширить эти результаты, включив более полную оценку всех видов рака в TCGA, для которых было доступно полное профилирование транскриптома.

Иерархическая кластеризация ранее описанных транскриптомов LGG позволила разделить опухоли на четыре группы [19], названные «Dendros 1–4» или «D1-D4» (рис. 4a), причем особи в D2 имели особенно плохие показатели. долгосрочное выживание по отношению к другим. ( P <3,1 × 10 ^{— 8} ) Ни один из оставшихся трех Dendros не показал каких-либо значительных различий в выживаемости (рис. 4b).

Рис. 4

Последовательная иерархическая кластеризация / профилирование t-SNE LGG. а . Иерархическая кластеризация 534 транскриптомов LGG из TCGA, показывающая четыре отдельные группы («Dendros»). Внизу панели ряды цветных полос представляют кластеры, в которые была сгруппирована каждая опухоль после анализа t-SNE с транскриптами этого пути. б . Выживаемость по Каплану-Мейеру для каждого Dendro (D1-D4) и значения P для каждого попарного сравнения. с . Выживаемость по Каплану-Мейеру всех 534 LGG на основе кластеров t-SNE, к которым они были отнесены после профилирования с помощью транскриптов пути биосинтеза пиримидина.Количество опухолей в каждом кластере и средняя выживаемость указаны, как и значения P для значимых парных сравнений. д . Выживаемость по Каплану-Мейеру пациентов из 149 членов группы Dendro 4 на основе их идентичностей в кластере t-SNE пути биосинтеза пиримидина. и . Выживаемость Каплана-Мейера для всех пациентов с LGG на основе кластеров t-SNE, к которым они были отнесены после профилирования с помощью транскриптов Hippo Pathway f . Выживаемость по Каплану-Мейеру пациентов из группы 115 Dendro 2 на основе их идентичностей Hippo Pathway t-SNE Cluster. г . Выживаемость по Каплану-Мейеру пациентов из группы Dendro 4 на основе их идентичностей Hippo Pathway t-SNE Cluster. ч . Выживаемость по Каплану-Мейеру всех пациентов с LGG на основе кластеров t-SNE, к которым они были отнесены после профилирования с помощью транскриптов пути PI3-киназы. и . Выживаемость по Каплану-Мейеру пациентов из Dendro 4 на основе идентичности кластера t-SNE пути PI3-киназы. Дж . Выживание по Каплану-Мейеру всех LGG на основе кластеров t-SNE, к которым они были отнесены после профилирования с транскриптами пути пути Wnt. к . Выживаемость по Каплану-Мейеру пациентов из Dendro 4 на основе идентичности кластера t-SNE пути Wnt

Получено профилирование всей группы LGG с 93 транскриптами из четырех путей, связанных с раком (биосинтез пиримидина, Hippo, передача сигналов PI3-киназы и Wnt) четыре кластера t-SNE в каждом случае (не показаны, но см. ссылку [13]. Когда эти кластеры были сопоставлены с отдельными опухолями в каждом из Dendros, было замечено несколько неслучайных ассоциаций. Например, t-SNE Cluster 1 пути Hippo Pathway непропорционально внесли вклад в подмножество Dendro 3 ( P = 1.03 × 10 ^-15 ), тогда как кластер 3 t-SNE пути Hippo и кластер 3 t-SNE транскриптов семейства киназ PI3 внесли непропорциональный вклад в группу Dendro 2 ( P = 1,4 × 10 ^{— 10} и P = 2,95 × 10 ^{— 7} соответственно) (рис. 4а).

Затем мы сравнили выживаемость индивидуумов в каждом кластере t-SNE, коллективно или в контексте отдельных групп Dendro. В первом случае мы обнаружили, что все опухоли, связанные с путем биосинтеза пиримидина, кластер 1 t-SNE, связаны со значительно более короткой выживаемостью по сравнению с другими кластерами t-SNE ( P = 9.14 × 10 ^{— 6} -6,25 × 10 ^{— 9} , рис. 4в). Это соответствовало непропорциональной представленности этих опухолей кластера 1 в Dendro 2 ( P = 3,16 × 10 ^{— 22} ). Действительно, единственные оставшиеся опухоли кластера 1 были связаны с Dendro 4, и, хотя их было немного ( n = 7), индивидуумы в этой группе имели особенно короткую выживаемость по сравнению с опухолями из других кластеров t-SNE, включающих эту группу. Дендро ( P = 0.0012–4.3 × 10 ^{— 7} , рис. 4г).

Опухоли кластера 4 Hippo Pathway также внесли непропорциональный вклад в Dendro 2 ( P = 1,44 × 10 ^{— 12} ). В соответствии с этим кластер 4, как в целом, так и в контексте Dendro 2, был связан с самой короткой выживаемостью по сравнению с другими кластерами t-SNE ( P = 0,023–6,8 × 10 ^–11 , рис. 2e и f). Единственные оставшиеся опухоли Hippo Pathway Cluster 4 были связаны с Dendro 4. Несмотря на то, что они были связаны с чрезвычайно короткой выживаемостью, их было слишком мало ( n = 2), чтобы сделать надежное заявление о значении этого.Однако индивидуумов с опухолями в Dendro 4 (медиана выживаемости = 2433 дня) можно дополнительно отличить по кластеру долгосрочной выживаемости t-SNE 1 (средняя выживаемость = 3470 дней) и краткосрочной выживаемости t-SNE 3 кластера (медиана выживание = 1547 дней) (рис. 4ж).

Аналогичные ассоциации могут быть получены в случае транскриптов пути PI3-киназы, где во всех опухолях люди из кластера 2 t-SNE имели более длительную выживаемость, чем люди из кластера 1 или кластера 3 ( P = 7,0 × 10 ^{— 4} а также.

7,1 × 10 ^{— 6} соответственно, рис. 4з). Кроме того, кластеры 1 и 2 t-SNE явно можно использовать для дальнейшего определения выживаемости в когорте Dendro 4 (медиана выживаемости = 1891 день против 3200 дней, соответственно, P = 0,03, рис. 4i).

Наконец, четыре кластера t-SNE, полученные из транскриптов сигнального пути Wnt, были связаны со значительными различиями в выживаемости во всех опухолях (рис. 4j). Среди наиболее значимых из них была низкая выживаемость людей с опухолями в кластере 1 по сравнению сКластер 2 и кластер 1 по сравнению с кластером 3 ( P = 2,0 × 10 ^{— 4} в каждом случае). Кроме того, разница выживаемости между кластерами 1 и 3 может быть использована в анализе когорты Dendro 4 для улучшения прогноза общей выживаемости в этой группе (медиана выживаемости 3200 дней против 2235 дней, P = 0,05, рис. 4k).

Другой пример, в котором подход тандемной последовательной иерархической кластеризации / t-SNE оказался особенно полезным для обеспечения более точной стратификации выживаемости пациентов, был замечен в случае 374 гепатоцеллюлярных карцином (ГЦК).Для этих опухолей иерархическая кластеризация сгенерировала шесть Dendro, которые показали только относительно скромные различия в выживаемости (Dendro 1 против Dendro 4, P = 0,021, рис. 5a и b). Профилирование t-SNE с четырьмя путями (биосинтез пуринов, биосинтез пиримидина, передача сигналов PI3-киназы и передача сигналов TGF-β), выполняемое отдельно или последовательно для каждого Dendro, было гораздо более полезным для выявления подгрупп пациентов с особенно благоприятными или неблагоприятными долгосрочными заболеваниями. выживание. Например, только профилирование t-SNE всех опухолей с транскриптами пути биосинтеза пуринов выявило три кластера со значительными различиями между кластерами 1 и 2 (медиана выживаемости = 1229 дней против2116 дней соответственно ( P = 0,01 и ссылка [13] и кластеры 2 и 3 (медиана выживаемости = 2116 дней против 1694 дней, соответственно, P = 0,035) (рис. 5c). Когда t-SNE профилирование с транскриптами Пуринового пути биосинтеза было применено к Dendro 3, однако наблюдались гораздо более существенные различия в выживаемости: кластеры 1 и 2 показывали среднюю выживаемость 643 дня и> 3500 дней ( P = 0,007), а кластеры 2 и 3 демонстрировали медиана выживаемости> 3500 дней и 837 дней (P = 0.01) (рис. 5г).

Рис. 5

Последовательная иерархическая кластеризация / профилирование t-SNE HCC. а . Иерархическая кластеризация 374 транскриптомов HCC из TCGA, показывающая шесть Dendros. Внизу панели цветные столбцы представляют результаты профилирования t-SNE, выполненного с использованием четырех указанных путей транскрипции. Каждому HCC был присвоен идентификатор кластера t-SNE в указанном семействе, как описано в легенде к фиг. 4. b . Выживаемость по Каплану-Мейеру пациентов из каждого Dendro (D1-D6).Единственная значимая разница между шестью группами была D1 против D4 ( P = 0,021). с . Выживаемость по Каплану-Мейеру всех 374 пациентов с ГЦК на основе трех кластеров, полученных с помощью t-SNE-профилирования опухолей с транскриптами пути биосинтеза пуринов. Количество опухолей в каждом кластере и средняя выживаемость указаны, как и значения P для значимых парных сравнений. д . Выживаемость по Каплану-Мейеру 58 пациентов из Dendro 3 на основе идентичности кластера пуринового пути биосинтеза t-SNE их опухолей. и . Выживаемость Каплана-Мейера для всех пациентов на основе двух кластеров, полученных с помощью t-SNE-профилирования опухолей с транскриптами пути биосинтеза пиримидина. ф . Выживаемость по Каплану-Мейеру пациентов из Dendro 6 на основе двух идентичностей кластера t-SNE пути биосинтеза пиримидина их опухолей. г . Выживаемость по Каплану-Мейеру всех пациентов на основе трех кластеров t-SNE, к которым были отнесены их опухоли после профилирования с помощью транскриптов пути киназы PI-3. ч . Выживаемость по Каплану-Мейеру пациентов из группы Dendro 2 на основе трех кластеров t-SNE пути PI3-киназного пути, к которым были отнесены их опухоли. и . Выживаемость по Каплану-Мейеру пациентов из группы Dendro 3 на основе трех кластеров t-SNE пути PI3-киназного пути, к которым были отнесены их опухоли. Дж . Выживаемость по Каплану-Мейеру для всех пациентов на основе трех кластеров t-SNE транскрипта пути TGF-β, к которым были отнесены их опухоли. к . Выживаемость по Каплану-Мейеру пациентов из Dendro 4 на основе трех кластеров t-SNE пути TGF-β, к которым были отнесены их опухоли.Небольшие расхождения в количестве пациентов связаны с небольшими различиями, в которых пациенты были иерархически сгруппированы, и / или с отсутствующими или неполными данными о выживаемости

Профилирование t-SNE всех ГЦК с транскриптами из Пути биосинтеза пиримидина сгенерировало два кластера со значительными различиями в выживаемости (2131 день против 1397 дней, P = 0,04, рис. 5д). Однако разница в 734 дня в этих средних показателях выживаемости была значительно увеличена до 1283 дней, когда когорта пациентов Dendro 6 была разделена в соответствии с кластером t-SNE, где были получены медианы выживаемости 2131 день и 848 дней ( P = 0.008) (рис. 5е).

Дополнительное профилирование t-SNE сигнальных транскриптов пути PI3-киназы также оказалось полезным при использовании для оценки всех HCC. Были идентифицированы три кластера с наблюдаемыми значительными различиями в выживаемости между кластерами 1 и 3 (1397 дней против 2456 дней, P = 0,014) и между кластерами 2 и 3 (1490 дней против 2456 дней, P = 0,011) ( Рис. 5g). Как и прежде, повышенная стратификация выживаемости была достигнута, когда профилирование t-SNE было применено к Dendro 2, где кластеры 1 и 3 показали медианные различия выживаемости 425 дней по сравнению с> 3500 дней ( P = 0,034) (рис. 5h). При применении к Dendro 3 кластеры 1 и 3 показали одинаково большие различия в средней выживаемости (802 дня против> 3500 дней, соответственно, P = 0,034) (рис. 5i).

Наконец, три кластера t-SNE транскриптов пути TGF-β были связаны с дифференциальной выживаемостью среди всех людей с HCC (рис. J и ссылка [13]). Значительные различия в средней выживаемости наблюдались для кластеров 1 и 2 (1397 дней и 2131 день, соответственно, P = 0.016) и для кластеров 2 и 3 (2131 день против 1423 дня, P = 0,025). Однако при применении только к группе Dendro 4 профилирование t-SNE транскриптов пути TGF-β позволило выявить весьма значимые различия в выживаемости между кластерами 1 и 2 (медиана выживаемости = 1271 день против> 3500 дней, P = 0,009 (рис. 5k)

Комплексная интерактивная коллекция раковых заболеваний человека, поддающаяся последовательному анализу

Учитывая возможность последовательного профилирования для улучшения стратификации выживаемости, мы создали интерактивный веб-сайт (https: // chpupsom19.shinyapps.io/Survival_Analysis_tsne_umap_TCGA и https://github.com/RavulaPitt/Sequential-t-SNE/). это позволяет запрашивать профили транскрипции> 10 000 образцов из 34 различных видов рака человека в TCGA, используя любой из подходов, описанных выше. В дополнение к ограниченному количеству примеров, показанных здесь (рис. 1, 2 и 3), этот веб-сайт позволяет проводить последовательный анализ t-SNE для всех групп опухолей в TCGA с использованием любого из путей, которые выявили различия в выживаемости среди t-SNE. кластеры (доп.Рис. 1 и исх. [13]). Дополнительный раздел веб-сайта позволяет вторично анализировать с помощью t-SNE опухоли, полные профили транскриптомов которых коррелируют с различиями в выживаемости (рис. 4 и 5). Это особенно полезно для некоторых из более крупных когорт рака TCGA, таких как KIRC, рак груди и немелкоклеточный рак легкого, где доступно более 500 тщательно отобранных образцов в каждой группе. Факторы, помимо общего размера выборки, которые могут ограничить надежность этих типов анализов, включают количество кластеров Dendros и t-SNE.

Широкий транскриптомный анализ природных антисмысловых транскриптов показывает их потенциальную роль в развитии рака груди

Abstract

Некодирующие РНК (нкРНК) составляют не менее 1/5 количества транскриптов млекопитающих, и около 90% длины генома активно расшифровано. Было продемонстрировано, что многие нкРНК играют роль в развитии рака. Среди них природные антисмысловые транскрипты (NAT) представляют собой последовательности РНК, которые комплементарны и перекрываются с последовательностями кодирующих белок транскриптов (PCT).NAT точно описаны как регулирующие экспрессию генов, и ожидается, что они будут действовать более часто в cis , чем другие ncRNAs, которые обычно функционируют в trans . В этой работе 22 рака молочной железы, экспрессирующие рецепторы эстрогена, и их пары здоровых тканей были проанализированы с помощью секвенирования специфической для цепи РНК. Чтобы подчеркнуть потенциальную роль NAT в регуляции генов, возникающих при раке молочной железы, были использованы три различных метода экстракции генов: анализ дифференциальной экспрессии NAT между опухолью и здоровыми тканями, анализ дифференциальной корреляции парных NAT / PCT между опухолью и здоровыми тканями и NAT / Изменение соотношения количества считываний ПКТ между опухолью и здоровыми тканями.Каждый из этих методов позволил получить списки пар NAT / PCT, которые, как было продемонстрировано, обогащены генами, связанными с выживанием, в независимой когорте (TCGA). Эта работа позволяет выделить списки NAT, которые обладают сильным потенциалом влиять на экспрессию генов, участвующих в патологии рака молочной железы.

Введение

За последнее десятилетие технология секвенирования РНК позволила обнаружить, что некодирующая часть генома составляет около 1/5 всего количества транскриптов ^1,2 .Эти некодирующие РНК (нкРНК) менее консервативны между видами, чем гены, кодирующие белки, но более консервативны, чем интроны и случайные межгенные области ^3,4 . Следовательно, вероятно, что эти некодирующие транскрипты выполняют биологические роли, которые постепенно расшифровываются, но все еще остаются в значительной степени неизвестными. Около 30-50% локусов генов, кодирующих белок, дополнительно экспрессируют нкРНК в направлении, противоположном направлению гена, кодирующего белок ^4,5 . Эти встречающиеся в природе антисмысловые транскрипты, называемые NAT, менее изучены, чем другие классы нкРНК по техническим причинам, поскольку их обнаружение и количественная оценка требуют сохранения информации о цепи происхождения транскрипта в процессе секвенирования.Действительно, стандартные методы секвенирования РНК и экспрессии микромассивов требуют синтеза двухцепочечной кДНК, который стирает информацию о цепи РНК, что приводит к количественной оценке экспрессии, которая является суммой экспрессий кодирующей РНК и соответствующего ей NAT. Коммерческие наборы, позволяющие собирать эту информацию, стали доступны только недавно, что открыло путь к высокопроизводительным исследованиям секвенирования цепочечной РНК.

Экспрессия NAT подвергается той же регуляции экспрессии, что и другие гены, но NAT накапливаются преимущественно в ядре, связанном с хроматином, в отличие от кодирующих мРНК, которые расположены в цитоплазме.NAT также обнаруживаются в других клеточных компартментах, таких как митохондрии ^6,7 . Экспрессия NAT описана во многих пунктуальных примерах, чтобы влиять на активность их смысловых или соседних генов в биологических событиях, таких как дифференцировка клеток и канцерогенез, при этом задействованы различные молекулярные механизмы ^8–11 . NAT могут регулировать экспрессию гена в транс, или цис. Учитывая тот факт, что и смысловые, и антисмысловые транскрипты транскрибируются из одной и той же области генома, ожидается, что антисмысловые транскрипты более часто ведут себя в цис , чем другие нкРНК, которые обычно функционируют в транс ¹¹ .Эта последняя особенность означает, что NAT могут регулировать свой аналог гена, кодирующего белок в том же локусе, что представляет большой интерес с терапевтической точки зрения: NAT могут, таким образом, обеспечить уникальную точку входа для терапевтического вмешательства в целевые гены с помощью ASO ( антисмысловые олигонуклеотиды), которые являются лекарствами, уже одобренными FDA для лечения нескольких заболеваний ^8,12–14 .

На сегодняшний день было проведено несколько исследований в масштабе всего транскриптома для изучения роли NAT в контексте рака груди.Эти исследования продемонстрировали, что пары NAT / PCT не регулируются во всем мире при этой патологии ^15–17 . Однако ни одно из этих исследований не сравнивало весь транскриптом парных опухолевых и здоровых тканей одних и тех же пациентов с технологией, которая сохраняет информацию о цепях транскриптов. Тем не менее, такой экспериментальный план потребуется для изучения того, является ли дерегуляция опухоли NAT специфичной для рака, чтобы определить, могут ли они играть роль в патологии. Здесь мы описываем результаты такого экспериментального дизайна в когорте из 22 ER + пациентов с раком молочной железы, чьи парные здоровые и опухолевые ткани были проанализированы путем секвенирования цепной РНК.

Эта работа позволяет уточнить роль NAT в регулировании своего аналога гена, кодирующего белок, в том же локусе патологии рака молочной железы, и количественно оценить, в какой степени это явление происходит. Сначала мы определили 3 списка пар NAT / PCT, которые не регулируются между здоровыми / опухолевыми тканями и связаны с регулированием, специфичным для NAT. Затем мы продемонстрировали, что эти списки обогащены генами, связанными с выживанием. Наконец, мы составили список генов, связанных с раком молочной железы, которые, вероятно, регулируются их NAT, на которые могут быть нацелены ASO в терапевтических целях.

Результаты

Роль, которую играют NAT в регуляции экспрессии их соответствующих кодирующих транскриптов, все еще в значительной степени неизвестна, а также может ли эта потенциальная регуляция играть роль в патологии рака молочной железы ER +. План эксперимента нашего исследования, использованный для ответа на этот вопрос в масштабе всего генома, изображен на рисунке 1. Двадцать две опухолевые ткани пациентов с раком груди ER +, а также их парные соседние здоровые ткани были подвергнуты специфическому секвенированию РНК и ДНК. анализ количества копий по массиву CGH.Характеристики пациентов приведены в таблице 1. Когорта содержит только опухоли размером более 20 мм и поровну разделена между подтипами просвета A и B, а также между высокоразвитыми (Ki67> 19%) и умеренно (Ki67 <19%) пролиферирующими опухолями. . Большинство из них имеют оценку 2 и 3 по Блуму.

Рис. 1. Рабочий процесс.

РНК и ДНК были одновременно экстрагированы из 23 опухолей ER + / HER2- рака молочной железы и соседних с ними здоровых тканей. Были выполнены специфичные для цепей секвенирование РНК с парными концами и сравнительная геномная гибридизация (CGH).Были выполнены этапы контроля качества и проверка RNA-Seq, которые привели к исключению одного пациента из-за плохой специфичности цепи этого образца. Эта стратегия позволила изучить дифференциальную экспрессию NAT и PCT между опухолями и здоровыми тканями, а также провести дифференциальный корреляционный анализ пар NAT / PCT. Были извлечены три списка генов с нарушенной регуляцией экспрессии NAT в опухолях, которые потенциально могут повлиять на их соответствующую экспрессию PC, а содержащиеся в них кодирующие гены были подвергнуты анализу выживаемости с помощью внешней когорты (TCGA).

Таблица 1.

Клинико-патологические характеристики пациента

Проверка RNA-Seq

Комбинированный анализ вариаций количества копий ДНК и модификаций уровней экспрессии РНК-транскриптов между опухолью и здоровыми тканями подтверждает наш анализ RNA-Seq: общие уровни экспрессии кодирования количество транскриптов генов внутри геномной амплификации или делеции, вновь приобретенных в опухоли, было соответственно увеличено и уменьшено, как и ожидалось (рис. 2А).

Рисунок 2. Проверка RNA-Seq.

A. Распределения складчатых изменений генов, как определено с помощью RNA-Seq, которые расположены в соматических изменениях числа копий (амплификации или делеции), как определено с помощью CGH. Четкие кривые показывают четкое влияние изменений числа копий на экспрессию гена (кратные изменения). Как и ожидалось, гены, расположенные в областях амплификации генома в опухоли, показали повышенную экспрессию, и наоборот. B. Кратные изменения экспрессии генов между опухолью и здоровыми тканями, полученные в текущем исследовании RNA-Seq, сравнивали с описанными во внешнем наборе данных микромассивов Affymetrix GSE65216.Это сравнение показало глобальное соответствие результатов с коэффициентом корреляции Спирмена 0,613 (значение p <0,001). C. Сравнивали относительную экспрессию белка, кодирующего ADAMTS9 и его NAT, ADAMTS9-AS2, в опухолях и здоровых тканях, полученную секвенированием РНК и ОТ-ПЦР. Значения RT-qPCR нормализовали по экспрессии эндогенного контрольного гена B2M. [p-значение <0,001 (***)].

Более того, изменения экспрессии генов между здоровыми и опухолевыми тканями, полученные в нашем наборе данных RNA-Seq, сравнивались с изменениями, полученными в независимом наборе данных (GSE65216).Вариации экспрессии генов между 10 здоровыми тканями молочной железы и 22 опухолями ER + (11 просвет A и 11 просвет B) были экстрагированы с использованием Geo2R ¹⁸ . Кратное изменение экспрессии генов, которые, как было обнаружено, дифференциально экспрессировались со скорректированным значением p <0,05 между здоровыми и опухолевыми тканями как в нашем наборе данных, так и в наборах данных GSE65216, сравнивали и представляли средний коэффициент корреляции Спирмена 0,613 (значение p <0,001). Более того, 76,6% этих генов по-разному модулировались в одном и том же направлении (Рисунок 2 B).В меньшем масштабе некоторые эксперименты RT-qPCR были выполнены на образцах РНК, которые использовались для нашего исследования RNA-Seq, чтобы подтвердить различия в экспрессии нескольких транскриптов между опухолью и здоровыми тканями. Среди прочего, подавление в опухолях опухолевого супрессора ADAMTS9 и его NAT, ADAMTS9-AS2, было подтверждено с помощью RT-qPCR (рисунок 2 C).

Экспрессия NAT составляет 17% от их кодирующего аналога в здоровых тканях и увеличивается до 26% в опухолях.

Затем мы определили пары генов, кодирующих белок, и соответствующие им антисенс, как подробно описано в разделе «Материалы и методы».Этот список можно найти в дополнительной таблице и содержит 9632 пары NAT / PCT, где по крайней мере один пациент имеет ненулевую экспрессию PC или AS либо в нормальной ткани, либо в опухоли. Поскольку 19846 кодирующих транскриптов экспрессировались в тканях молочных желез, 49% кодирующих транскриптов имели сопутствующую соответствующую экспрессию NAT. В глобальном масштабе количество считываний NAT составляет 17% от их кодирующих аналогов в здоровых тканях и 26% в опухолях (таблица 2), что свидетельствует о глобальном увеличении уровней экспрессии NAT в опухолях молочной железы.Более того, среднее соотношение числа считываний между парами генов PCT / NAT, одновременно экспрессируемых локусом, составляет 1544 в здоровых тканях и 1013 в опухолях (дополнительная таблица).

Таблица 2: Распределение относительной интенсивности экспрессии NAT и соответствующего им PC среди 9632 пар NAT / PC.

Это исследование было сосредоточено на парах NAT / PCT, где и PCT, и AS были экспрессированы по крайней мере у 7 из 22 пациентов как в опухоли, так и в здоровой ткани. Эта группа из 4884 пар генов содержит 60% от общего числа считываний, и экспрессия отношения NAT / PCT увеличивается в опухолях.

Неожиданно мы наблюдаем, что распределения кратности изменения NAT, присутствующие как в геномных амплификациях, так и при делециях, смещены в сторону более высоких кратных изменений, чем соответствующие распределения, основанные на генах, кодирующих белок (рис. 3 A).

Рисунок 3. A. Распределение складчатых изменений NAT, присутствующих в геномных амплификациях и делециях. Значения экспрессии

NAT смещены в сторону более высоких кратных изменений, чем соответствующие распределения их генов, кодирующих белок. Б.Схематическое изображение доли различных классов дифференциальных корреляций между опухолями и здоровыми тканями. В опухолевых тканях создаются или теряются в основном положительные корреляции экспрессии между NAT и их соответствующим PCT. Цифры, указанные на графике, представляют собой количество пар NAT / PCT в этой категории; + / + = значимая положительная корреляция между NAT и PCT существует в прилегающей здоровой ткани и сохраняется в опухоли; +/- = значимая положительная корреляция между NAT и PCT существует в прилегающей здоровой ткани и становится отрицательной в опухоли; + / 0 = значимая положительная корреляция между NAT и PCT существует в прилегающей здоровой ткани и теряется в опухоли; — / — = значимая отрицательная корреляция между NAT и PCT существует в прилегающей здоровой ткани и сохраняется в опухоли; — / + = значимая отрицательная корреляция между NAT и PCT существует в прилегающей здоровой ткани и становится положительной в опухоли; — / 0 = значимая отрицательная корреляция между NAT и PCT существует в прилегающей здоровой ткани и теряется в опухоли; 0/0 = нет значимой корреляции между NAT и PCT, ни в прилегающей здоровой ткани, ни в опухоли.

Основываясь на уровнях экспрессии в различных типах тканей, мы решили сосредоточиться на парах NAT / PCT, где и PC, и AS были экспрессированы по крайней мере у 7 из 22 пациентов, как в опухоли, так и в здоровой ткани. . Это составляет более 60% от общего числа считываний пар NAT / PCT (таблица 2). В этой группе из 4884 пар генов экспрессия NAT значительно увеличена и составляет 31% от их кодирующего аналога в здоровых тканях и 47,8% в опухоли. Эта подгруппа генов содержит гены PC, которые обладают более сильным потенциалом регулирования со стороны своих аналогов NAT.

Положительная корреляция экспрессии между NAT и соответствующими им PCT создается в опухолевых тканях

Чтобы выделить вновь появляющиеся или исчезающие корреляции между NAT и соответствующими им PCT в опухоли, был проведен дифференциальный корреляционный анализ между всеми парами PCT и NAT с программой DGCA (v. 1.0.1) ¹⁹ . Полные результаты можно найти в дополнительной таблице, показывающей глобальную положительную корреляцию экспрессии между NAT и их соответствующими PCT: средние коэффициенты корреляции Спирмена равны 0.431 и 0,533 соответственно в здоровых тканях и опухолях, когда наблюдается значимая корреляция (значение p <0,05), а именно в 20% пар NAT / PCT. Количество достоверно коррелированных пар NAT / PCT не различается в здоровых и опухолевых тканях. Положительный средний z-показатель (0,460) наблюдается в случае значительной дифференциальной корреляции NAT / PCT между опухолью и здоровыми тканями (значение p <0,05), что означает, что в глобальном масштабе в 11% парных корреляций NAT / PCT, которые являются с нарушенной регуляцией в опухолях по сравнению со здоровыми тканями (567/4884 пары) корреляции становятся более положительными.Пропорция различных классов дифференциальных корреляций между опухолями и здоровыми тканями изображена на рисунке 3B, подчеркивая тот факт, что в опухолевых тканях создаются или теряются в основном положительные корреляции экспрессии между NAT и их соответствующими PCT. Наблюдалось очень мало инверсий корреляции. Некоторые примеры пар NAT / PCT, демонстрирующих нарушенную корреляцию экспрессии в опухолевой ткани, представлены в таблице 3, показывающей, что гены, хорошо известные в области рака молочной железы, демонстрируют нерегулируемую корреляцию экспрессии с их антисмысловыми транскриптами.

Таблица 3: Примеры корреляций Спирмена между NAT и связанными с раком кодирующими генами, которые изменены в опухолях по сравнению с соседними здоровыми тканями.

Кодирующие белки гены, демонстрирующие нерегулируемую соответствующую экспрессию NAT в опухолях, преимущественно связаны с выживаемостью пациентов с раком груди

Для выделения пар NAT / PCT, потенциально связанных с патологией рака груди, из 4884 пар использовали три различных метода отбора генов.

Во-первых, ранее описанный DiffCor основан на дифференциальной корреляции количества считываний NAT / PCT между здоровыми и опухолевыми тканями.Список пар NAT / PCT, корреляция которых значительно различается между нормальными и опухолевыми тканями (значение p <0,05) и чей класс корреляции различается между опухолью и нормальными тканями (т. Е. Классы 0/0, + / +, - / -: удалено) был выбран и содержит 441 пару NAT / PCT.

Второй метод основан на дифференциальной экспрессии NAT между опухолями и здоровыми тканями. Список из 738 пар NAT / PCT, в которых NAT были значительно дифференциально выражены (скорректированное значение p <0.05) между нормальной и опухолевой тканями.

Третий метод основан на изменении отношения NAT / PCT между здоровой и опухолевой тканями и позволяет определить третий список, называемый VarRatio, который содержит пары NAT / PCT с экстремальными значениями распределения VarRatio (S8 — Дополнительные рисунки). Этот список VarRatio можно разделить на крайнюю левую и крайнюю правую части. Крайние слева, 610 пар NAT / PCT имеют соотношение PCT / NAT, которое снижается в опухоли либо из-за понижающей регуляции экспрессии PCT, либо из-за повышающей регуляции экспрессии NAT, либо из-за того и другого; и обратное наблюдается для 540 пар NAT / PCT в самой правой части распределения.

Три списка генов можно найти на дополнительных рисунках (с S9 по S12), и, как и ожидалось, многие пары NAT / PCT появляются в некоторых из этих списков, которые содержат в общей сложности 1784 уникальных пары NAT / PCT, дерегулированных при раке молочной железы. .

Чтобы убедиться, что гены, кодирующие белок из списков DiffCor, NATDiffExp и VarRatio, участвуют в патологии рака груди, их связь с выживаемостью была рассчитана на основе образцов RNA-Seq из набора данных TCGA. Каждый из этих трех списков представляет долю генов, связанных с выживаемостью в наборе данных TCGA, большую, чем пропорция, полученная в списке случайно выбранных генов, кодирующих белок (Таблица 4), что означает, что PCT, демонстрирующий нерегулируемую соответствующую экспрессию NAT в опухоли, обогащен генами. связанные с выживаемостью больных раком груди.Критерий хи-квадрат Пирсона дал статистически значимые p-значения для каждого из трех списков по сравнению со списком случайно выбранных генов, кодирующих белок.

Таблица 4: Гены PC, демонстрирующие нерегулируемую соответствующую экспрессию NAT в опухоли, предпочтительно связаны с выживаемостью пациентов с раком груди

Гены, кодирующие белок из трех списков генов DiffCor, DiffExp и VarRatio (слева и справа) были протестированы на связь с выживаемостью с помощью набор данных TCGA RNA-Seq по раку груди.Процент генов, связанных с выживаемостью в каждом списке, сравнивался со случайно выбранными генами, кодирующими белок.

72 раковых гена представляют нерегулируемый профиль экспрессии NAT в образцах рака груди

Когда список генов переписи раковых генов из базы данных COSMIC (http://cancer.sanger.ac.uk/census) сравнивался с содержанием из наших 3 списков генов, которые, вероятно, регулируются их NAT и вовлечены в патологию рака груди, 72 гена были обнаружены общими (S13 — Дополнительные рисунки).Этот список содержит гены рака, которые могут быть нацелены на ASO, разработанные для взаимодействия с соответствующими NAT этих генов, чтобы специфически регулировать их экспрессию.

Обсуждение

Рак груди представляет собой проблему общественного здравоохранения: в промышленно развитых странах около 1 из 8 женщин будет страдать от него в течение своей жизни. Наиболее частым подтипом является рецептор эстрогена, экспрессирующий рак груди (ER + / HER2-), с 75% случаев. В случае первичного заболевания большинство пациентов лечат хирургическим путем с лучевой и эндокринной терапией или без нее.Тем не менее, большое количество этих видов рака будет страдать от рецидива и разовьются метастазы — серьезное опасное для жизни событие, которое сильно связано с плохим исходом — и потребует химиотерапии в случае симптоматического висцерального заболевания. Таким образом, проводится поиск новых методов лечения, а также биомаркеров, которые позволили бы лучше прогнозировать риск рецидива. Наше исследование исследует все еще новую область антисмысловой транскрипции для определения списков раковых генов и приведет к дальнейшим работам по определению прогностических маркеров и / или адаптации таргетного лечения антисмысловыми олигонуклеотидами (ASO) ¹⁴ .

Это первый случай, когда исследование RNA-Seq, специфичной для цепи целого транскриптома, направленное на антисмысловую транскрипцию, проводится в парных опухолях и здоровых тканях молочной железы. Этот экспериментальный план позволяет обнаружить нарушение регуляции экспрессии NAT, которое происходит в раковых тканях, и статистически связать их с изменениями экспрессии соответствующего кодирующего транскрипта. В частности, мы обнаружили, что многие положительные корреляции между NAT и их аналогом PCT появлялись или исчезали в опухоли, предполагая недавно приобретенные или утраченные регуляции кодирующих белок транскриптов в раковых тканях.Однако потребуются дальнейшие функциональные молекулярные исследования, чтобы подтвердить существование таких регуляций PCT их NAT в списке пар раковых генов, которые были выделены в этой работе.

Разница в кратности изменения между NAT, локализованными в геномных изменениях, и их кодирующими аналогами, при этом NAT демонстрирует более высокие кратные изменения, а также значительное увеличение экспрессии NAT в опухолях, как правило, указывают на то, что NAT могут подвергаться особой активации. механизм, специфичный для опухолей (рис. 3А, таблица 2).

Более того, связь этих NAT с выживаемостью, которая была оценена с использованием их аналогов, кодирующих белок, в качестве заместителя в большой независимой когорте, показывает, что нарушение регуляции, наблюдаемое в ландшафте NAT, не является просто случайным побочным продуктом опухолевый процесс. Были проведены анализы для изучения взаимосвязи генов PC и AS с известными прогностическими факторами, но не было обнаружено значимых результатов. Таким же образом были проведены анализы обогащения в генах путей без каких-либо заметных результатов.

В нескольких исследованиях уже изучалась роль антисмысловой транскрипции при раке груди ^15–17 . Гринчук и др. проанализировали пары NAT / PCT, которые не регулируются при раке груди, чтобы определить пути, в которых они особенно участвуют, и определили сигнатуры прогноза на основе NAT / PCT. Однако наборы данных микрочипов Affymetrix были поддержкой этой работы, и этот метод не является внутренне специфичным для нити ¹⁵ . Более того, нормальные ткани молочной железы и проанализированные опухоли не совпадали.Balbin et al. провел крупномасштабное исследование многоцепочечной РНК-Seq на уровне всего генома на 376 образцах рака, в том числе 60 первичных раках груди. Но, как и в исследовании Гринчука, опухолевые ткани не были сопоставлены со здоровыми, и, как следствие, эти исследования не изучали, пациент за пациентом, были ли корреляции экспрессии NAT / PC уже присутствовали в нормальной ткани или были ли они недавно приобретены опухоль. Эта особенность нашего экспериментального дизайна позволила выделить тот факт, что экспрессия NAT повышена в опухолевых тканях по сравнению с их кодирующим аналогом.Действительно, доля считываний NAT в парах NAT / PCT во всем мире повышена в опухолях по сравнению со здоровыми тканями.

As Balbin et al . ранее заявляли, что в любом локусе, где одновременно транскрибируются PCT и NAT, PCT экспрессируется примерно в 1000 раз больше, чем NAT, но мы дополнительно наблюдали, что эта разница в экспрессии ниже в опухолях, чем в здоровых тканях. Мы также измерили, что в глобальном масштабе 10% транскриптов происходили из антисмысловой цепи в здоровых тканях и что эта доля увеличивалась до 13% в опухолях (8% были описаны Balbin et al .). Однако у некоторых пациентов соотношение NAT / PCT в опухоли намного выше, чем у других. Эта неоднородность в дерегуляции экспрессии NAT у пациентов может быть использована для разделения пациентов на подгруппы с различным прогнозом. Одним из ограничений нашего исследования является небольшой размер и короткое время наблюдения нашей когорты, что не позволило провести такой анализ.

Наши результаты также подтверждают наблюдение Гринчука и др. о том, что корреляции экспрессии между NAT и PCT в опухолях были разными по сравнению с неродственными здоровыми тканями.Мы уточнили это наблюдение, используя парные ткани одного и того же пациента, и показали, что в глобальном масштабе эти корреляции становятся более значительными и более положительными в опухолях. Более того, мы выделили пары генов, в которых происходит потенциальная регуляция новой экспрессии PCT / NAT в раковых тканях. После выполнения анализа выживаемости с данными экспрессии генов из внешней когорты (TCGA) выяснилось, что эти пары генов NAT / PCT также были обогащены генами, связанными с выживанием, что позволяет предположить, что регуляция транскрипции противоположной цепи может играть роль в груди раковое заболевание.

Таким образом, наш отчет открывает новую область исследований рака и показывает, что экспрессия NAT часто повышается в образцах рака по сравнению с подобранными нормальными тканями. Актуальность этого наблюдения для кодирования экспрессии генов, биологии рака, прогноза и лечения необходимо будет определить на конкретных и больших когортах парных образцов.

Материалы и методы

Заявление об этике

Ткани были получены из биобанка Университета Льежа (N = 12) и из клиники St Vincent в Рокуре (N = 11), Бельгия.Это исследование было одобрено местным институциональным советом по этике (2010/229). Все аспекты исследования соответствуют Хельсинкской декларации. Набор пациентов в Университетскую больницу Льежа проводился по методике отказа. Пациенты клиники Сент-Винсент в Рокуре были проинформированы об исследовательской работе и дали письменное информированное согласие.

Пациенты и образцы

Это ретроспективное исследование было проведено на 23 криоконсервированных раковых и прилегающих здоровых тканях 23 женщин, страдающих раком груди, экспрессирующим эстрогеновые рецепторы.Образцы были собраны с 2010 по 2014 год. Один пациент был исключен из-за плохой специфичности цепи RNA-Seq. Клинические и патологические параметры пациентов, включенных в окончательный анализ, были зарегистрированы и суммированы в таблице 1.

Краткое изложение плана эксперимента показано на рисунке 1.

Экстракция ДНК / РНК / миРНК

ДНК, РНК и миРНК одновременно экстрагировали с использованием универсального набора All Prep DNA / RNA / miRNA Universal (Qiagen, Бельгия) в соответствии с протоколом производителя.Качество РНК оценивали с помощью BioAnalyzer (Agilent, Бельгия).

TruSeq

^® Total Stranded Total RNA от Illumina ^® и секвенирование нового поколения

Библиотеки РНК-секвенирования для 22 опухолей молочной железы и парных прилегающих тканей были сконструированы из 500 нг общей РНК с использованием TruSeq ^® Stranded Total RNA набор и набор для удаления рРНК Ribo-Zero. На стадии химической фрагментации был получен фрагмент РНК размером 180 п.н. Этот шаг был адаптирован в соответствии с качеством РНК, как описано в протоколе производителя.Синтезы первой и второй цепи кДНК проводили с использованием случайных гексамерных праймеров. Для амплификации библиотек была проведена 12 циклов ПЦР. Качество и размер библиотек кДНК оценивали с помощью Bioanalyzer Agilent Chip DNA 1000. Использовали только библиотеки размером от 290 пар оснований до 300 пар оснований, и 14 пмоль конечных библиотек кДНК загружали в аппарат Illumina HiSeq 2000 для создания кластеров и секвенирования парных концов 2×100 п.н., со средним значением 8,26E + 09 оснований, секвенированных для каждого образца (4 образца / проточная ячейка).Комплекты и аппараты были от компании Illumina, Нидерланды.

CGH array

Array Сравнительная геномная гибридизация проводилась в здоровых и опухолевых тканях 22 пациентов с использованием платформы Agilent 60K для микрочипов (G4827A-031746; Agilent Technologies, Санта-Клара, Калифорния, США) в соответствии с инструкциями производителя. Матрицы сканировали с помощью сканера микрочипов высокого разрешения SureScan (Agilent Technologies, Санта-Клара, Калифорния, США). Данные и изображения были импортированы с помощью Feature Extraction V.9.5.3.1 Программное обеспечение и результаты анализировали с помощью программного обеспечения CytoGenomics v2.5 (Agilent Technologies, Санта-Клара, Калифорния, США). Алгоритм Aberration Detection Methods 2 (ADM-2) использовался с отсечкой 6,0, за которым следовал фильтр для выбора областей с тремя или более соседними зондами, и для обнаружения изменений количества копий использовался минимальный средний коэффициент log2 ± 0,25. Качество каждого эксперимента оценивалось путем измерения разброса коэффициента логарифмической производной с помощью программного обеспечения CytoGenomics v2.0. Геномные позиции были основаны на эталонной последовательности человека (hg19) UCSC от февраля 2009 г. (сборка эталонной последовательности NCBI build 37).Фильтрацию изменений количества копий проводили с помощью программного обеспечения BENCHlab CNV (Картахения, Лёвен, Бельгия).

Количественная оценка экспрессии генов с помощью РНК-секвенирования

Контроль качества секвенированных считываний был выполнен с помощью программного обеспечения FastQC (версия 0.11.2; https://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/ ). Считывания секвенирования были сопоставлены с геномом человека hg19 GRCh47-75 (Ensembl) с использованием программного обеспечения Star 2.4.1c ²⁰ . Качество сопоставления оценивалось с помощью инструмента Picard RnaSeqMetrics из пакета программного обеспечения Picard (v.1,127; http://broadinstitute.github.io/picard/) с параметрами по умолчанию. Результаты доступны на дополнительных рисунках S1. Назначение счетчиков считываний было выполнено с помощью инструмента htseq-count из пакета программного обеспечения HTSeq (версия 0.6.1) ²¹ . Оценка качества данных была выполнена путем вычисления специфичности цепочки (соотношения считываний секвенирования, отображающих неверные цепи) всех образцов с помощью htseq-count, что привело к удалению одного пациента с аберрантной специфичностью цепи. Программное обеспечение DESeq2 (v.1.10.1) использовался для нормализации счетчиков считываний, оценки дисперсии, выполнения преобразования стабилизации дисперсии и выполнения независимой фильтрации с использованием среднего значения нормализованных счетчиков в качестве статистики фильтра, тем самым регулируя порог фильтрации на 33%, в соответствии со стандартным рабочим процессом ²² . Эффективность стабилизации дисперсии оценивалась путем построения MA-графиков log2 кратного изменения по сравнению со средним выражением с помощью DESeq2. Поиск выбросов был выполнен путем вычисления расстояний Кука для каждого гена и каждого образца с помощью DESeq2 (S2 / S3 / S4 / S5 / S6-Дополнительные рисунки).График главных компонент был выполнен для оценки соответствующего разделения между двумя классами выборки (S7-Дополнительные рисунки). Все вышеупомянутые показатели качества и производительности дали приемлемые результаты для всех оставшихся образцов.

Количественная RT-qPCR

Обратную транскрипцию выполняли с использованием набора Reverse Aid H Minus (LifeTechnologies, Бельгия) из 100 нг тотальной РНК с использованием случайных гексамерных праймеров в случае кодирующих генов и использования целевых специфичных праймеров, связанных с неродственным синтетическим ДНК-олигонуклеотид в случае NAT.

Количественную ПЦР проводили с использованием специфических зондов 6-FAM / ZEN / IBFQ (IDT, Бельгия) с Kapa Probe Fast qPCR Master Mix (Sopachem, Бельгия) на приборе LightCycler 480 (Roche). В случае амплификации кодирующего гена праймеры конструировали по стандартной методике. В случае амплификации гена NAT, праймер, специфичный для целевого NAT, и праймер, специфичный для синтетического олигонуклеотида, добавляемого во время обратной транскрипции, используются для обеспечения возможности амплификации, специфичной для стойки.

Относительную экспрессию рассчитывали с использованием методов стандартных кривых с использованием β2-микроглобулина в качестве эндогенного стандарта.

Последовательности праймеров и зондов можно найти в дополнительных материалах и методах.

Определение пар белок-кодирующий / антисмысловой

Список пар белок-кодирующих генов и их соответствующих антисмысловых сигналов был создан на основе сборки генома человека и аннотации гена GRCh47 (выпуск 75) из Ensembl ²⁴ .Для включения в список пары генов должны удовлетворять трем следующим условиям: перекрывающиеся координаты; противоположные пряди; один из двух генов должен иметь биотип, кодирующий белок, в то время как другой может иметь любой из следующих биотипов: 3prime_overlapping_ncrna, антисмысловой, IG_C_pseudogen, IG_V_pseudogen, lincRNA, misc_RNA, polymorphic_pseudogeneRNA, snopopronic2, senseover_transcript, snoverlab . Обоснование включения всех биотипов, не кодирующих белок, в качестве предполагаемых антисенс, заключается в том, что аннотация антисенс по Ensembl ограничена уже подтвержденными антисенсами, и, таким образом, она может упустить ранее неизвестные антисенс.

Способы выбора списка генов NAT / PCT

1) Список DiffCor: анализ дифференциальной корреляции между парами кодирующих белок и антисмысловых транскриптов выполнялся с помощью программного обеспечения DGCA (версия 1.0.1) ¹⁹ . Пары кодирующих белок / антисмысловых генов, корреляция которых значительно различается между нормальными и опухолевыми образцами (скорректированное значение p <0,05) и чей класс корреляции различается между опухолевыми и нормальными образцами (т. Е. Мы удалили 0/0, + / +, - / - классы).

2) Список NATDiffExp: Анализ дифференциальной экспрессии между всеми опухолевыми и здоровыми образцами был выполнен с помощью программного обеспечения DESeq2 (v. 1.10.1) для всех генов, следуя стандартному многофакторному рабочему процессу для парных образцов. Были отобраны пары белок-кодирующих / антисмысловых генов, в которых антисмысловые эффекты выражались значительно (скорректированное значение p <0,05) между нормальными и опухолевыми образцами.

3) список varRatio: Анализ вариации отношения отсчетов считываний был выполнен следующим образом: давайте определим вариацию отношения отсчетов считываний (varRatio) для каждой пары генов NAT / PCT как

Пары генов NAT / PCT, соответствующие экстремальным значениям распределения varRatio, были отобраны путем применения порога (среднее ± стандартное отклонение) к логарифмически преобразованному распределению varRatios (S8-Дополнительные рисунки).

Для всех трех методов отбора списков генов пары генов, в которых кодирующий белок или антисмысловой фрагмент экспрессировались менее чем в 7 образцах опухоли или 7 образцах здоровых, были отброшены.

Анализ выживаемости

Все гены, кодирующие белок из трех списков генов, были протестированы на ассоциацию с выживаемостью на внешнем наборе данных из 1066 образцов РНК-Seq из опухолей у пациентов с раком груди у женщин (Пакет R TCGA Biolinks; ²⁵ ). Связь с выживаемостью регистрировалась, когда значение p логарифмического рангового теста было ниже 0.05. Соотношение генов, связанных с выживаемостью в каждом списке, сравнивалось с таким же соотношением, вычисленным для списка случайно выбранных генов, кодирующих белок.

Благодарности

Мы благодарим платформу GIGA-genotranscriptomic с особым вниманием к Воутеру Коппитерсу, команде медицинских онкологов и менеджеров данных отделения медицинской онкологии, а также биотеке CHU Liège. Мы также благодарим Жерома Тири, Бушру Бужемлу и Кристофа Пуле.

Сноски

• ↵ # Гай Иерусалим, Клэр Хосе и Винсент Бурс разделили старшее авторство.

• Финансовая поддержка: Эта работа была поддержана Французским сообществом Бельгии, Бельгийскими фондами научных исследований (F.R.S.-FNRS), F.R.S.-FNRS-Televie, CHU Liege (F.I.R.S) и регионом Валлон [XSPRELTRIN]. SW является докторантом P.D.R.-FNRS; SE является докторантом F.R.I.A-FNRS. Вычислительные ресурсы были предоставлены Consortium des Équipements de Calcul Intensif (CÉCI), финансируемым Бельгийскими фондами научных исследований (F.R.S.-FNRS) в рамках гранта № 2.5020.11

• Автор, ответственный за переписку

  Имя: Клэр Хосс.

  Почтовый адрес: GIGA-Research, Лаборатория генетики человека, Domaine Universitaire du Sart Tilman, Льежский университет, 4000 Льеж, Бельгия.

  Телефон: +32 4366 24 74; Факс: +32 4 366 81 46

  Электронная почта: [email protected]

• Заявление о раскрытии конфликта интересов Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

Axsome Therapeutics, Inc.(AXSM) Стенограмма телеконференции

за 1 квартал 2021 г.

Источник изображения: Пестрый дурак.

Axsome Therapeutics, Inc. (NASDAQ: AXSM)
Телефонный звонок о доходах за первый квартал 2021 года
10 мая 2021 года, 8:00 утра по восточному времени

Содержание:

• Подготовленные примечания
• Вопросы и ответы
• Обзвон участников

Подготовлено примечаний:

Оператор

Доброе утро и добро пожаловать на конференц-связь Axsome Therapeutics.[Инструкции оператора]

А теперь я хотел бы передать конференцию вашему хозяину, Марку Якобсону, главному операционному директору Axsome Therapeutics. Пожалуйста продолжай.

Марк Джейкобсон — Главный операционный директор

Спасибо, оператор. Доброе утро, и спасибо всем за то, что присоединились к нам на сегодняшней телеконференции. Наш пресс-релиз о прибылях и убытках, содержащий обновленную корпоративную информацию и подробную информацию о финансовых результатах компании за первый квартал 2021 года, появился недавно и доступен на нашем веб-сайте по адресу axsome.com.

Во время сегодняшнего звонка мы сделаем определенные прогнозные заявления. Эти заявления могут включать утверждения, касающиеся, помимо прочего, эффективности, безопасности и предполагаемого использования наших исследуемых агентов, наших клинических и неклинических планов, наших планов по представлению или сообщению дополнительных данных, ожидаемого поведения в источнике будущих клинических испытаний. , нормативные планы, планы будущих исследований и разработок, коммерческие планы и возможное предполагаемое использование денежных средств и инвестиций.

Эти прогнозные заявления основаны на текущей информации, предположениях и ожиданиях, которые могут изменяться и связаны с рисками и неопределенностями, которые могут привести к тому, что фактические результаты будут существенно отличаться от тех, которые содержатся в прогнозных заявлениях. Эти и другие риски описаны в наших периодических документах, поданных в Комиссию по ценным бумагам и биржам, включая наши квартальные и годовые отчеты. Предупреждаем, что не следует чрезмерно полагаться на эти прогнозные заявления, которые сделаны только по состоянию на сегодняшний день, и компания отказывается от каких-либо обязательств по обновлению таких заявлений.

Сегодня ко мне присоединяются доктор Эррио Табуто, главный исполнительный директор; Ник Пиззи, финансовый директор; Лори Энглеберт, старший вице-президент по коммерческому развитию и развитию бизнеса; Д-р Аманда Джонс, старший вице-президент по клиническому развитию; и д-р Седрик О’Горман, старший вице-президент по медицинским вопросам. Herriot сначала представит обзор компании, а затем рассмотрит недавние разработки и предстоящие вехи. Вслед за Херриотом Лори предоставит коммерческую информацию, а затем Ник рассмотрит наши финансовые результаты.Затем мы откроем очередь для вопросов. Вопросы будут задаваться в порядке их поступления.

На этом я передам вызов Эррио.

Эррио Табуто — Главный исполнительный директор

Спасибо, Марк. Доброе утро всем, и спасибо всем за то, что вы присоединились к Axsome Therapeutics по финансовым результатам за первый квартал 2021 года и конференц-звонку по обновлению бизнеса. Время проведения этого звонка совпадает с Месяцем психического здоровья, и Axsome с гордостью отмечает май как Месяц психического здоровья, сотрудничая с группами защиты интересов и помогая повысить осведомленность и поддержку людей, живущих с депрессией и другими психическими расстройствами.

В первом квартале мы продолжили делать значительные шаги к тому, чтобы стать ведущей биофармацевтической компанией для ЦНС, специализирующейся на поставках потенциально изменяющих жизнь лекарств людям, живущим с серьезными заболеваниями ЦНС. Целенаправленная работа команды Axsome привела к представлению нашего NDA для AXS-05 для лечения большого депрессивного расстройства или БДР. NDA было предоставлено приоритетное рассмотрение FDA, и FDA установило целевую дату действия PDUFA для NDA от 22 августа 2021 года.

NDA для нашего второго кандидата в ведущий продукт, ASX-07 для острого лечения мигрени, находится на пути к представлению в FDA в этом квартале. И мы ожидаем объявить решение FDA относительно принятия заявки в третьем квартале. С двумя поданными заявками о неразглашении информации и запланированной датой действия PDUFA для AXS-05 в конце августа Axsome быстро приближается к стадии коммерциализации. Лори предоставит некоторые подробности о нашей предкоммерческой деятельности для обеспечения готовности к запуску при условии успешной проверки NDA.

Остальная часть нашего дифференцированного конвейера на поздних стадиях продолжает развиваться. AXS-05 также разрабатывается для лечения возбуждения при болезни Альцгеймера, и участие в исследовании ACCORD фазы 3 продолжается. Наш продукт-кандидат AXS-12 для лечения нарколепсии приближается к началу запланированного исследования фазы 3 в начале третьего квартала. Что касается нашего продукта-кандидата AXS-14 для лечения фибромиалгии, мы недавно встретились с FDA, чтобы обсудить его дальнейший план клинических разработок, и мы ждем письменных отзывов от встречи.

Наше портфолио включает четыре продукта-кандидата на поздней стадии, находящиеся в стадии разработки для шести различных показаний, представляющих неудовлетворенные медицинские потребности, которыми страдает большой процент американцев. Мы воодушевлены их потенциалом приносить значительную пользу пациентам и нашим запланированным подходом к коммерциализации.

Сейчас я передам звонок Лори, которая предоставит коммерческое обновление.

Лори Энглеберт — Старший вице-президент по коммерческому развитию и развитию бизнеса

Спасибо, Эрриот, и доброе утро всем.Это захватывающее время для Axsome, поскольку мы продолжаем готовиться к успешному запуску AXS-05 при большом депрессивном расстройстве. Сегодня я расскажу вам о нашей коммерческой деятельности, связанной с подготовкой к запуску.

Распространенность симптомов депрессии у взрослых в США неуклонно растет в течение многих лет. Однако недавние исследования показали, что в 2020 году почти треть взрослого населения США испытала симптомы депрессии. Это более чем в четыре раза больше по сравнению с 2019 годом.В результате быстрого обострения психических заболеваний и связанного с ними личного и экономического бремени, существует неоспоримая острая необходимость в информировании и поддержке пострадавших.

В случае утверждения AXS-05 станет важным новым вариантом лечения для многих американцев, живущих с депрессией. Мы стремимся донести до пациентов эти важные инновации, своевременно выполнив коммерциализацию продукта. Ожидаемая дата PDUFA — 22 августа, мы ожидаем запуска в четвертом квартале этого года.

В соответствии с культурой Axsome, коммерческая стратегия запуска является новаторской и целенаправленной. Ранее я уже говорил о плане использования нашей платформы Digital Centric Commercialization или DCC как средства оптимизации взаимодействия для всех типов клиентов. Наша приверженность и вера в цифровую ориентацию только усилились за последний год, поскольку исследования продолжают указывать на сильное предпочтение и тенденцию в этом направлении среди наших основных клиентов. Наша основная технологическая инфраструктура теперь полностью внедрена, и мы продолжаем наращивать наши цифровые возможности.Используя сложные данные и аналитику, оптимизированную систему и инструменты цифровой поддержки, наша платформа DCC позволит более эффективно, действенно и конструктивно взаимодействовать с врачами и потребителями.

Наряду с созданием нашей платформы DCC за последний год мы создали коммерческую команду, которая сочетает широту и глубину коммерческого опыта с желанием внедрять инновации. Я очень горжусь нашей коммерческой командой, и меня впечатляет их интеллектуальное лидерство и страсть к помощи тем, кто страдает заболеванием ЦНС.Функциональное высшее руководство по маркетингу, доступу на рынок, коммерческим операциям и продажам уже на месте.

Мероприятия по запуску сосредоточены на возможном запуске AXS-05 в четвертом квартале в случае утверждения. Подготовка также включает готовность к запуску для потенциального запуска AXS-07. Наша маркетинговая команда сосредоточена на обучении болезням и планировании продвижения после запуска PDUFA. Команда по выходу на рынок продолжает участвовать в постоянных разрешенных обсуждениях с плательщиками, обеспечивая осведомленность об Axsome и профиле продукта ASX-05, а также активно настраивая комплексные службы поддержки пациентов.

Команда коммерческих операций профессионально работает над реализацией нашей концепции DCC. И, наконец, наша команда по продажам определила оптимальный размер, структуру и структуру нашего торгового персонала и теперь концентрируется на готовности продавцов, поскольку начался прием на работу как на уровне руководства по сборке, так и на уровне представителя. И, наконец, помимо коммерции, группа по медицинским вопросам сосредоточена на презентации данных на предстоящих конгрессах и продолжении взаимодействия MSL с KOL.

Теперь я передам это Нику, который проверит наши финансовые показатели.

Ник Пиззи — Финансовый директор

Спасибо, Лори. Доброе утро всем. Сегодня мы обсудим результаты нашего первого квартала 2021 года и дадим некоторые финансовые рекомендации.

Мы закончили первый квартал с примерно 165 миллионами долларов наличными по сравнению с примерно 184 миллионами долларов наличными в конце четвертого квартала, т.е. чистое уменьшение примерно на 19 миллионов долларов. Расходы на НИОКР составили 16,6 млн долларов США за квартал, закончившийся 31 марта 2021 года, против 27 долларов США.5 миллионов за сопоставимый период в 2020 году. Снижение расходов на НИОКР было вызвано единовременным платежом в предыдущем периоде в размере 10,2 миллиона долларов, связанным с лицензионным соглашением Pfizer, а также несколькими нашими клиническими испытаниями, которые продолжались в сопоставимый период, впоследствии было завершено.

Текущий квартал включает сбор в размере 2,9 миллиона долларов, связанный с регистрационным взносом PDUFA за подачу NDA для AXS-05. После окончания квартала мы получили подтверждение от FDA о том, что наш запрос на отказ от требований для малого бизнеса был принят, и нам возместят этот сбор за подачу заявления PDUFA.

Общие и административные расходы составили 11,2 млн долларов США за квартал, закончившийся 31 марта 2021 года, и 5 млн долларов США за аналогичный период 2020 года. Изменение в основном связано с увеличением предкоммерческой деятельности и расходов на компенсацию акций. Чистый убыток составил 29,3 миллиона долларов или 0,78 доллара на акцию за квартал, закончившийся 31 марта 2021 года, по сравнению с чистым убытком в 32,5 миллиона долларов или 0,88 доллара на акцию за сопоставимый период в 2020 году.

Напоминаем, что в настоящее время у нас есть 225 миллионов долларов. срочная кредитная линия, из которых 175 миллионов долларов финансирования остаются доступными.Этот обязательный не разводняющий капитал дает нам дополнительную финансовую гибкость благодаря ожидаемым потенциальным коммерческим запускам AXS-05 и AXS-07. Мы считаем, что наша текущая кассовая позиция в размере 165 миллионов долларов США вместе с оставшимся выделенным капиталом из нашей срочной кредитной линии на 225 миллионов долларов достаточна для финансирования наших предполагаемых операций на основе нашего текущего операционного плана как минимум до 2024 года.

На этом завершается наш финансовый обзор за первый квартал 2021 года. . Теперь я перезвоню Марку, чтобы он возглавил обсуждение вопросов и ответов.

Марк Джейкобсон — Главный операционный директор

Спасибо, Ник. Оператор, первый вопрос.

Вопросы и ответы:

Оператор

Спасибо. [Инструкции оператора] Ваш первый вопрос исходит от линии Чарльза Дункана из Кантора Фицджеральда. Пожалуйста продолжай. Ваша линия теперь открыта.

Чарльз Дункан — Кантор Фицджеральд — Аналитик

Да, потрясающе.Доброе утро, Эррио и команда. Поздравляю с действительно хорошим прогрессом в четверти. У меня был быстрый вопрос относительно PDUFA — предстоящая дата PDUFA для AXS-05 для MDD. Ожидаете ли вы AdCom до этого? Сообщило ли FDA что-нибудь, или даже если они этого не сделали, готовы ли вы провести AdCom?

Эррио Табуто — Главный исполнительный директор

Спасибо, Чарльз за вопрос. Мы не получили никаких сообщений от FDA о том, что будет AdCom.Теперь это может измениться. И если это изменится, мы сможем сообщить об этом Street как можно скорее. А что касается подготовки к AdCom, как вы знаете, когда вы подаете NDA, это очень важная процедура. Итак, основываясь на этой работе, мы думаем, что будем готовы ко всему, что произойдет в течение цикла обзора. AdComs — потенциальная ожидаемая часть любого цикла обзора. Но на данный момент у нас нет никаких указаний на то, что будет AdCom.

Чарльз Дункан — Кантор Фицджеральд — Аналитик

Хорошо. Это полезно. Позвольте мне задать Лори быстрый вопрос, а затем я вернусь в очередь, и это касается коммерческой готовности. Когда вы думаете о AXS-05 по сравнению с AXS-07, можете ли вы выделить некоторые из синергетических эффектов в ходе подготовки, которую вы проводите? Но также, возможно, как бы вы разрешили любые различия в базе рецептов? И как это влияет на оптимальный размер силового поля? И я также полагаю, что вы не говорили об этих числах, но можете ли вы их раскрасить?

Лори Энглеберт — Старший вице-президент по коммерческому развитию и развитию бизнеса

Привет, Чарльз, спасибо.Спасибо за вопрос. Вы меня слышите?

Чарльз Дункан — Кантор Фицджеральд — аналитик

Да.

Лори Энглеберт — Старший вице-президент по коммерции и развитию бизнеса

Я немного не в себе. Поэтому я просто хочу убедиться, что все могут ясно слышать.

Чарльз Дункан — Кантор Фицджеральд — аналитик

Звучит отлично.

Лори Энглеберт — Старший вице-президент по коммерции и развитию бизнеса

Отличный вопрос.Будьте уверены, поскольку мы планировали коммерциализацию, мы всегда планировали, что AXS-07 потенциально будет очень близко следовать за AXS-05. И это включает в себя все, от того, как мы настраиваем нашу платформу DCC с точки зрения возможности быстрого выполнения с точки зрения AXS-05 и AXS-07, а также того, как мы структурируем наши продажи. Таким образом, в то время как наш отдел продаж, очевидно, будет изначально построен так, чтобы обращаться к врачам, назначающим лечение депрессии, существует немало общего с врачами в отношении мигрени и депрессии.И поэтому мы ожидаем, что сможем быстро развернуться, когда AXS-07 будет готов к запуску.

Чарльз Дункан — Кантор Фицджеральд — Аналитик

Хорошо. Последний вопрос Нику, просто по хозяйству. Ник, поздравляю с возвращением денег от агентства, но я знаю, что мы имеем дело с правительством США здесь. Когда вы их действительно ожидаете? И можем ли мы предположить, что он, возможно, вернется и попадет в баланс во втором квартале?

Ник Пиззи — Финансовый директор

Да.Привет, Чарльз. Да, это хороший вопрос. Итак, они приняли отказ, как вы слышали во вступительном слове. Так что сейчас мы просто ждем возмещения. Итак, процесс был запущен, чтобы вернуть 2,9 миллиона долларов, и мы должны получить их в ближайшее время. Я не могу назвать конкретное время, когда мы получим это в ответ.

Чарльз Дункан — Кантор Фицджеральд — Аналитик

Хорошо. Звучит неплохо. Спасибо, что ответили на мои вопросы. Поздравляю с продвижением.

Оператор

Ваш следующий вопрос исходит от линии Джуна Ли из Truist Securities. Пожалуйста продолжай. Ваша линия теперь открыта.

Джун Ли — Truist — аналитик

Привет. Спасибо, что ответили на наши вопросы, и поздравляю с прогрессом. Итак, первый вопрос: распространенность депрессии превышает четырехкратный уровень до пандемии, как вы говорите, и это подтверждается многими другими источниками, но обязательно ли это означает, что существует так много диагностируемых пациентов с БДР? Мне просто любопытно, действительно ли те люди, которые утверждают, что страдают депрессией, — представляют группу пациентов, которым можно поставить медицинский диагноз и прописать ASX-05? И у меня есть продолжение.Спасибо.

Эррио Табуто — Главный исполнительный директор

Спасибо, Джун за вопрос. Если вы посмотрите на данные CDC, на которые мы ссылались, если вы посмотрите на процент пациентов или процент взрослых в США с симптомами депрессии, которые они измерили, которые составляли около 6,9% или примерно 7% в 2019 году, это фактически соответствует распространенность БДР или большого депрессивного расстройства. Таким образом, это те же цифры CDC, которые выросли примерно до 30% или около того, а затем этот уровень пациентов или U.С. взрослые с симптомами депрессии. Таким образом, мы не знаем ответа на вопрос, будет ли у всех этих людей диагностировано БДР. Но исходная отправная точка очень хорошо коррелировала с — она ​​действительно хорошо коррелировала с распространенностью БДР.

А теперь — так что я хотел бы передать это Лори, чтобы посмотреть, есть ли у нее что-нибудь еще, чтобы добавить к этому.

Лори Энглеберт — Старший вице-президент по коммерции и развитию бизнеса

Привет, Джун.Спасибо за вопрос. Это то, что мы, очевидно, активно наблюдаем, чтобы диагностировать и лечить от лекарств. Но что мы действительно знаем из данных, так это то, что в 2020 году общий рынок рецептов вырос на 6-7%. Это будет означать, что в воронку поступает больше пациентов.

Джун Ли — Truist — Analyst

Хорошо, отлично. С нетерпением жду цифр и прогресса. И второй вопрос: это здорово, что вы получили приоритетную проверку, но это действительно сокращает время для инспекций клинических центров и, что более важно, производственных площадок.Не могли бы вы рассказать нам немного о своем директора по маркетингу? Вы можете раскрыть, кто они? А если не можете, может быть, их возможности, уровень опыта и были ли они недавно проверены или нет? Спасибо.

Эррио Табуто — Главный исполнительный директор

Таким образом, наш директор по маркетингу — это директор по маркетингу с голубыми фишками. И поэтому их регулярно осматривают. Таким образом, у них была [Техническая проблема], их можно проверять не реже одного раза в год.

Джун Ли — Truist — Аналитик

Хорошо.Спасибо.

Оператор

Ваш следующий вопрос исходит от Марка Гудмана из SVB Leerink. Пожалуйста продолжай. Ваша линия теперь открыта.

Роанна Руис — SVB Leerink — Аналитик

Привет. Это Роанна на линии для Марка. Спасибо, что ответили на вопрос. Мне было любопытно, немного подробнее о плане запуска AXS-05. Не могли бы вы сообщить нам, как … какова частота ваших действий по привлечению плательщиков и, возможно, объем образовательных программ, которые вы выполняете перед запуском AXS-05?

Лори Энглеберт — Старший вице-президент по коммерции и развитию бизнеса

Привет, Роанна.Спасибо за вопрос. Итак, с точки зрения взаимодействия с плательщиками, мы были и продолжаем взаимодействовать с плательщиками разрешенным образом, с теми, кто производит Axsome в целом, а также действительно знакомит их с клиническим профилем AXS-05. Плательщики крайне заинтересованы. Как мы упоминали ранее, в Америке происходит кризис психического здоровья, который ложится на систему огромным личным и экономическим бременем. Плательщики, очевидно, очень заинтересованы в понимании и получении дополнительных сведений о продуктах, которые могут облегчить их усилия.

Эрриот Табуто — Главный исполнительный директор

А затем, что касается образовательных программ, в зависимости от предстоящих медицинских конференций, есть возможность для спонсируемых образовательных программ, которые повышают осведомленность о болезненном состоянии. И недавно у нас было значительное присутствие в Американской психиатрической ассоциации, где у нас был спонсируемый театр продуктов, основанный на неудовлетворенных потребностях в рамках MDD, ограничениях текущих методов лечения и будущих направлениях с точки зрения клинических разработок.И по всем оценкам, основанным на показателях, полученных от Американской психиатрической ассоциации, театр превосходных продуктов был одним из самых посещаемых на этой конференции. Так что есть еще много конференций, на которых мы можем продвигать подобные образовательные программы.

Роанна Руис — SVB Leerink — Аналитик

Понятно. Спасибо. И еще один, если смогу. Я не был уверен, раскрыли ли вы это, но любопытно, сколько целевых учетных записей вы планируете детализировать при первоначальном запуске AXS-05?

Лори Энглберт — Старший вице-президент по коммерции и развитию бизнеса

Да.Отличный вопрос. [Техническая проблема] Что я могу вам сказать, так это то, что размер и структура нашего отдела продаж были давно определены, что фактически было частью импульса для нашей платформы DCC. Платформа DCC была действительно разработана, чтобы помочь максимально повысить эффективность наших продаж. Но будьте уверены, мы не будем жертвовать ни качеством, ни охватом нашей целевой позиции.

Роанна Руис — SVB Leerink — Аналитик

Понятно. Спасибо.

Оператор

Ваш следующий вопрос исходит от линии Вамила Дивана из Mizuho Securities.Пожалуйста продолжай. Ваша линия теперь открыта.

Вамил Диван — Mizuho Securities USA, LLC — Аналитик

Привет, отлично. Спасибо, что ответили на вопросы. Может, два, если бы я мог. Всего одна досье на AXS-05, очевидно, здорово, что у вас есть исключение — принято в приоритетном рассмотрении. Мне просто любопытно, были ли у вас какие-либо дальнейшие обсуждения с FDA по поводу исследования ASCEND? Я думаю, учитывая некоторые сюрпризы, которые мы недавно видели от регулирующих органов, были некоторые опасения по поводу того, будет ли это испытание достаточно масштабным, достаточно надежным, чтобы считаться ключевым? Я полагаю, что, может быть, вы можете дать какие-либо дальнейшие обновления вашего разговора, что было бы полезно.А потом просто на AXS-07, может, вы нас просто обновите. Я знаю, вы говорите, что собираетесь подавать здесь во втором квартале. Я думаю, что в этом году его отодвинули и немного отодвинули. Опять же, не могли бы вы просто напомнить нам о том, каковы ограничивающие факторы с точки зрения подачи заявки в FDA? Спасибо.

Седрик О’Горман — Старший вице-президент по медицинским вопросам

Спасибо за вопросы. Что касается AXS-05 и NDA, мы можем сказать вам, что это очевидно.Заявка принята, ей дано приоритетное рассмотрение. Таким образом, FDA явно имеет все необходимое для проведения тщательной проверки. Конечно, мы не можем так или иначе комментировать особенности нашего взаимодействия с FDA. Что касается пробной версии ASCEND, мы — я напоминаю вам, что это очень значимый продукт. И мы ранее раскрыли, что испытание ASCEND после прорывной встречи было объявлено ключевым испытанием. Что касается AXS-07, мы очень приближаемся к тому, чтобы подать NDA в этом квартале, как мы ранее заявляли, и там действительно нет никаких обновлений.Команда прилагает все усилия, чтобы обеспечить своевременную и качественную подачу документов.

Вамил Диван — Mizuho Securities USA, LLC — Аналитик

Хорошо. Все в порядке. Спасибо.

Оператор

Ваш следующий вопрос исходит от линии Ятин Сунеджа из Guggenheim Partners. Пожалуйста продолжай. Ваша линия теперь открыта.

Ятин Сунежа — Гуггенхайм — Аналитик

Привет, ребята.Спасибо, что ответили на мой вопрос. Можете ли вы помочь нам понять время — сроки регистрации в программе 3 фазы нарколепсии? Похоже, его немного подтолкнули. Есть ли решающий фактор для начала этого исследования? Так что это номер один. Во-вторых, если вы можете немного прокомментировать ценовую войну, которую вы, возможно, вели в отношении AXS-05. Есть ли определенная ценовая категория, при которой вы наблюдаете чувствительность маркетинговых исследований? И сохраните ли вы цену ниже уровня специализации, и что вы могли бы сделать или что вы могли бы сделать в отношении доплаты и помощи, которую вы могли бы предоставить? Спасибо.

Эррио Табуто — Главный исполнительный директор

Так что спасибо, Ятин за вопросы. Я передам слово Лори, чтобы она ответила на вопрос о цене. Что касается исследования нарколепсии, мы находимся на пути к началу этого исследования в начале третьего квартала. Итак, изначально мы дали указание, что во втором квартале начнется третья фаза исследования. А потом, честно говоря, это произойдет примерно в первый месяц третьего квартала. Так что это находится в пределах нормальной вариабельности, которой можно было бы ожидать при планировании комплексного исследования в качестве исследования фазы 3.И Лори насчет ценообразования.

Лори Энглеберт — Старший вице-президент по коммерции и развитию бизнеса

Конечно. Привет, Ятин. Спасибо за вопрос. Для нас немного преждевременно раскрывать какие-либо подробности о ценах, но вы можете использовать — мы планируем сделать это ближе к запуску. Но что я могу вам сказать, так это то, что мы очень много работаем, чтобы обеспечить справедливое и своевременное устранение [технических проблем], при этом адекватно отражая ценность продукта.И наряду с этим очевидно привлечение и обучение плательщиков клиническому профилю AXS-05. Но, как упоминал ранее Седрик, мы продолжаем представлять дополнительные данные на предстоящих конгрессах, которые мы будем использовать в качестве вспомогательной информации для плательщиков. С точки зрения …

Ятин Сунежа — Гуггенхайм — Аналитик

Лори, еще один вопрос — извините, продолжайте.

Лори Энглеберт — Старший вице-президент по коммерческому развитию и развитию бизнеса

Нет, я просто собирался ответить на ваши вопросы о поддержке пациентов и доплате.Просто хотел заверить вас, что мы — как я уже упоминал в подготовленных замечаниях, мы готовим услуги поддержки пациентов, чтобы пациенты легко получали этот продукт.

Ятин Сунежа — Гуггенхайм — Аналитик

Понятно. У меня вопрос по Veeva — вашему партнерству с Veeva Systems. Если вы можете немного поговорить, как вы собираетесь это использовать? Что именно делает эта система? Есть ли другие компании, которые успешно использовали платформу Veeva при запуске продукта? Просто пытаюсь понять преимущества, которые это дает вам, и какие… какие успешные запуски были сделаны с использованием этой платформы.Спасибо.

Лори Энглберт — Старший вице-президент по коммерции и развитию бизнеса

Да. Спасибо за этот вопрос. Поэтому важно помнить, что Veeva — это важнейший фундаментальный компонент нашей платформы DCC, а не единственный компонент. Компании по всему миру используют Veeva прямо сейчас, и мы очень довольны партнерством, которое мы с ними установили, заложив основу для DCC. Мы также работаем над добавлением систем и дополнением Veeva Systems цифровыми возможностями, которые позволяют вводить данные в реальном времени и передавать сложную аналитику обратно торговым представителям, чтобы они могли эффективно и эффективно звонить по рекламе.

Ятин Сунежа — Гуггенхайм — Аналитик

Понятно. Спасибо.

Оператор

Ваш следующий вопрос исходит от линии Рама Селвараджу из H.C. Уэйнрайт. Пожалуйста продолжай. Ваша линия теперь открыта. Рам Сельвараджу из H.C. Уэйнрайт, пожалуйста. Ваша линия теперь открыта. И звонящий вам может быть отключен.

Марк Джейкобсон — Главный операционный директор

Итак, почему бы нам не перейти к следующему вопросу, и мы вернемся к Раму.

Оператор

Конечно. Ваш следующий вопрос здесь исходит от Джо Тома из Cowen and Company. Пожалуйста продолжай. Ваша линия теперь открыта.

Джозеф Том — Коуэн — аналитик

Привет. Доброе утро, и спасибо, что ответили на мои вопросы. Первый, я знаю, вы немного затронули разницу между усилением депрессивных симптомов, которое наблюдалось за последний год, и формальным диагнозом БДР или ТРЗ.Ожидаете ли вы, что это повлияло на участие в исследовании MERIT, или как вы об этом думаете? А второй — на AXS-14. Не могли бы вы просто напомнить нам, каковы здесь ожидания базового случая, и у пациентов или у FDA есть определенный симптом, на который они изучают наиболее внимательно? Спасибо.

Седрик О’Горман — Старший вице-президент по медицинским вопросам

Конечно. Итак, что касается включения в MERIT, напомню, что это исследование — просто напомню, что исследование MERIT — это испытание фазы 2 при лечении устойчивой депрессии.Таким образом, в этом исследовании используется рандомизированный подход. Так что это довольно много людей. В настоящее время мы ждем рецидивов в этом испытании, и это определяет время реабилитации. А потом вы задали вопрос про AXS-14. Итак, это наш продукт-кандидат от фибромиалгии. Не могли бы вы уточнить, что вы хотели бы знать об AXS-14?

Джозеф Том — Коуэн — Аналитик

Да. Я предполагаю, что с точки зрения следующих шагов, каковы ваши ожидания от базового сценария? Ожидается ли что-то вроде еще одной фазы 3? Можете ли вы подать заявку на текущий пакет? И затем, я думаю, в ваших разговорах с FDA появился ли какой-то симптом, который их больше всего беспокоил, будь то боль или усталость? Как вы думаете, что принесет вам пользу? Спасибо.

Седрик О’Горман — Старший вице-президент по медицинским вопросам

Мы встретились с FDA во втором квартале, как мы и планировали в отношении AXS-14. А в настоящее время ждем и ждем окончательных протоколов встречи. И у нас будет что сказать, когда мы получим последние протоколы собрания. Но мы хотели бы получить письменный отзыв, прежде чем предоставлять какие-либо подробности. Что касается общих симптомов фибромиалгии, вы точно указали, что фибромиалгия включает в себя боль, но не только боль, но и другие симптомы, такие как [Технический вопрос]. В текущих нормативных конечных точках исследований фибромиалгии они действительно включают симптомы.Таким образом, очевидно, что существует боль, это одна из регуляторных конечных точек, но другая регулирующая конечная точка, например, является функциональной конечной точкой, которая включает в себя многие другие симптомы фибромиалгии.

Джозеф Том — Коуэн — аналитик

Отлично. Спасибо.

Оператор

Ваш следующий вопрос исходит от Криса Хауертона из Jefferies. Пожалуйста продолжай. Ваша линия теперь открыта.

Крис Хауертон — Джеффрис — аналитик

Замечательно.Большое спасибо за ответы на вопросы. Я думаю, что многих из них спросили на данный момент, но я думаю, что по мере того, как мы движемся к коммерциализации, это план — есть ли у команды план, чтобы дать нам больше цветной и достоверной информации о том, как они Мы разработали коммерческую инфраструктуру в команде. Каковы будут ключевые показатели в будущем? Так что просто пытаюсь понять, когда мы можем узнать больше о коммерческих усилиях, структуре и всем остальном? Второй вопрос, который у меня был бы, касается испытания MERIT и считывания.Очевидно, мы ожидаем PDUFA для AXS-05 в ближайшее время в августе. Итак, как эта информация может повлиять на вашу деятельность в коммерческой среде, если она будет одобрена в то время? Спасибо.

Лори Энглеберт — Старший вице-президент по коммерции и развитию бизнеса

Привет, Крис. Спасибо. Спасибо за вопрос. Итак, что касается того, когда мы раскроем размер и структуру, вы можете ожидать этого примерно при запуске. Обычно именно тогда мы готовы раскрыть эту информацию.Я думаю, что я могу вам сказать, что мы недавно, в течение последних трех недель, начали наши усилия по найму сотрудников по продажам на уровне руководства на местах, а также на уровне представителей. Отклик был ошеломляющим с точки зрения количества претендентов, а также их качества. Поэтому мы очень довольны полученным ответом, так как он дает нам отличное понимание того, что мы сможем уложиться в сроки, которые мы намеревались соблюдать. А также убедитесь, что у нас есть люди правильного типа на должностях с учетом нашего уникального подхода и видения.Что касается показателей того, как мы собираемся измерять успех при запуске, мы будем — вы можете ожидать, что мы начнем думать об их раскрытии ближе к запуску.

Крис Хауертон — Джеффрис — Аналитик

Хорошо. Спасибо.

Эррио Табуто — Главный исполнительный директор

И что касается вашего вопроса по делу MERIT.

Седрик О’Горман — Старший вице-президент по медицинским вопросам

Итак, испытание MERIT, это испытание Фазы 2, которое мы начали одновременно с другими нашими исследованиями. , исследования COMET, например, подисследования COMET, с целью получения данных для предоставления клиницистам по широкому кругу пациентов с БДР.Вот почему началось судебное разбирательство. И поэтому, как только он будет озвучен с точки зрения его потенциального воздействия на запуск, влияние будет таким, каким оно будет — это позволит нам публиковать и предоставлять дополнительные данные клиницистам о том, как AXS-05 работает в различных типах пациенты с БДР.

Крис Хауертон — Джеффрис — Аналитик

Хорошо. Это чудесно. Большое спасибо за вопросы.

Оператор

Ваш следующий вопрос исходит от линии Мэтта Каплана из Ладенбурга Тельмана.Пожалуйста продолжай. Ваша линия теперь открыта.

Мэтт Каплан — Ладенбург Тельманн — аналитик

Привет. Доброе утро, ребята. Просто хотел узнать немного больше о … вашем взаимодействии с плательщиками. В частности, Лори, может быть, ты сможешь дать нам представление о том, как мы должны думать о развертывании покрытия с течением времени, может быть, сначала, а затем в первые шесть-12 месяцев в отношении коммерческого и другого покрытия для AXS-05? А также, я думаю, с AXS-07 наступает по пятам, потенциально требуя одобрения.Но что вы думаете и о взаимодействии с плательщиками по AXS-07?

Лори Энглеберт — Старший вице-президент по коммерции и развитию бизнеса

Привет, Мэтт. Спасибо. Итак, что касается освещения, это — я знаю, я много говорил об этом на этой телеконференции, но на самом деле слишком рано для нас раскрывать это, но это также преждевременно, потому что наши обсуждения продолжаются. И поэтому мы думаем об этом с точки зрения предложений услуг по поддержке пациентов, чтобы обеспечить страхование пациентов.Но мы ожидаем, что продукт будет покрыт. Мы уверены, что товар будет покрыт. И мы уверены, что плательщики очень заинтересованы в профиле продукта. Что касается AXS-07, который — в ходе этих обсуждений — мы провели исследование рынка, но мы не обсуждали ASX-07 с плательщиками специально, за исключением простого представления всего портфеля Axsome.

Мэтт Каплан — Ладенбург Тельманн — аналитик

Очень хорошо.Спасибо. А потом, возможно, Эррио. Что касается следующих показаний для AXS-05, не могли бы вы немного рассказать о том, где вы находитесь и как это — как продвигается программа фазы 3 агитации AD? И какие еще шаги для отказа от курения?

Эррио Табуто — Главный исполнительный директор

Конечно. Спасибо, Мэтт, за эти вопросы. И я думаю, что передам Аманде Джонс, чтобы она раскрасила эти две программы.

Мэтт Каплан — Ладенбург Тельманн — аналитик

Отлично.Спасибо.

Аманда Джонс — Старший вице-президент по клиническому развитию

Привет. Что касается агитационной программы AD, она успешно продвигается. Для нас еще немного рано давать какие-либо официальные рекомендации по общему статусу, основываясь только на характере дизайна исследования, которое включает в себя реакцию пациентов, а затем их рандомизацию и развитие рецидива. И второй вопрос касался отказа от курения?

Мэтт Каплан — Ладенбург Тельманн — аналитик

Да.

Аманда Джонс — Старший вице-президент по клиническому развитию

Итак, мы планируем встретиться с FDA в третьем квартале. А затем, основываясь на нашем взаимодействии с ними, мы предоставим обновленную информацию об этой программе.

Седрик О’Горман — Старший вице-президент по медицинским вопросам

И позвольте мне добавить к комментариям Аманды относительно возбуждения болезни Альцгеймера. Так что — в дополнение к прогрессу, достигнутому в испытании, хотя пока еще рано, показатели, которые мы наблюдаем внутри компании, подтверждают наши первоначальные рекомендации по данным, считанным во второй половине 2022 года.

Мэтт Каплан — Ладенбург Тельманн — аналитик

Хорошо. Спасибо за добавленную деталь.

Оператор

Ваш следующий вопрос исходит от линии Майлза Минтера из Уильяма Блэра. Пожалуйста продолжай. Ваша линия теперь открыта.

Майлс Минтер — Уильям Блэр — аналитик

Спасибо за ответы на вопросы. Только один для плательщика и для AXS-05. Кажется разумным, что плательщик, вероятно, собирается пройти несколько терапий.И к тому времени, когда врач пытается прописать этот продукт, технически он [неразборчиво] населению. Мне интересно, есть ли у вас возражения от врачей, которые [неразборчиво] пропустили конечную точку, поэтому мы не обязательно видели контролируемые положительные данные? И я предполагаю, что если это так, то каково ваше текущее послание, которое вы обучаете этим врачам, чтобы они переступили черту, чтобы прописать это при потенциальном запуске?

Лори Энглеберт — Старший вице-президент по коммерческому развитию и развитию бизнеса

Привет, Майлз.Так что я, конечно, отвечу на некоторые из ваших вопросов, но я хотел бы передать их Седрику с точки зрения того, что MSL слышат по этим вопросам.

Седрик О’Горман — Старший вице-президент по медицинским вопросам

Да. И я счастлив поделиться с Майлзом, что это природа клинических испытаний, люди, которые действительно участвуют в клинических испытаниях в центре MDD и, как правило, реагируют на существующие методы лечения. Таким образом, по сути, пациенты, попадающие в БДР, уже являются пациентами, которые в некоторой степени сопротивляются.Особого сопротивления не было, потому что люди понимают, что новые [технические проблемы], возникающие после новых методов лечения, имеют тенденцию к появлению на рынке [технических проблем]. И я думаю, что данные, которые мы сгенерировали для сопоставления БДР и бупропиона [фонетическое] сенсорное исследование в сравнении с плацебо, демонстрируют дифференцированный клинический профиль, как с точки зрения быстроты начала действия, так и с точки зрения раннего улучшения качества жизни. и функционирование. Так что я думаю, что в целом клинический профиль и отличие AXS-05 от того, что мы слышим в полевых условиях, является убедительным аргументом в пользу того, почему они используют этот препарат, они видят отличие от авторитетных источников.

Эррио Табуто — Главный исполнительный директор

Справа. И если можно, еще добавлю. Одна из вещей, которые мы слышим от KOL и MSL в этой области на основе нашей недавней презентации данных по подисследованиям COMET, например, наши подисследования COMET в TRD, заключается в том, что есть очень убедительный профиль, который Появляется множество доказательств, показывающих, что препарат на самом деле работает так же хорошо у тех пациентов, у которых есть TRD и которым не удалось пройти несколько направлений лечения, как и у пациентов, проходящих лечение на переднем крае.

И еще одна вещь, которую мы слышим от экспертов в этой области, знакомых с TRD и просто с депрессией в целом, заключается в том, что на самом деле довольно впечатляет то, что у нас было по существу четыре испытания фазы 3, все из которых были положительный. Таким образом, даже если вы посмотрите на исследование STRIDE-1 в TRD, препарат четко отделился от активного контроля с использованием более высокой дозы. И эффект, который наблюдался в отношении депрессивных симптомов, был очевиден на первой и второй неделе. Поэтому важно помнить, что в исследовании TRD устойчивое значение было достигнуто на первой и второй неделе в популяции пациентов с TRD.И не только это, улучшения качества жизни и инвалидности были намного выше, чем при использовании других агентов. В целом, это было — это очень хорошо, и на самом деле, MSL получают много вопросов о STRIDE из-за его положительного [Технического вопроса] того, что происходит с изменчивостью, которая ожидается в этой популяции пациентов.

Лори Энглеберт — Старший вице-президент по коммерческому развитию и развитию бизнеса

Привет, Майлз.Я просто добавлю сюда как ваш третий комментарий — вопрос, чтобы прокомментировать ваш вопрос. То, что только что сказали Седрик и Эррио, очень согласуется с тем, что мы слышим от плательщиков. Они принимают во внимание всю популяцию пациентов в исследовании, которое мы провели, и эту популяцию.

Майлс Минтер — Уильям Блер — Аналитик

Да. Я думаю, что все это вместе с тем, что я слышал. Может быть, еще один быстрый.Я знаю, что вы не комментируете протокол, потому что ждете его, но в руководстве по денежным средствам, которое вы предоставили сегодня, действительно ли это включает положения о потенциальном дополнительном клиническом исследовании AXS-14 при фибромиалгии? Спасибо.

Ник Пиззи — Финансовый директор

Таким образом, наш прогноз по денежным средствам, безусловно, включает расходы на AXS-14. Итак, как вы знаете, как было сказано ранее, мы стимулируем API, который представляет собой новое химическое соединение. И мы действительно хотим убедиться, что у нас есть готовые медицинские препараты, поскольку они необходимы для регистрации.Так что это — так что эти расходы необходимы для любого следующего потенциального шага. Что касается специфики плана клинической разработки, мы дождемся получения письменного отзыва от агентства, прежде чем делать какие-либо заявления.

Майлс Минтер — Уильям Блэр — аналитик

Достаточно справедливо. Спасибо за вопросы.

Оператор

Ваш следующий вопрос исходит от линии Дэвида Хоанга из SMBC. Пожалуйста продолжай. Ваша линия теперь открыта.

Дэвид Хоанг — SMBC — Аналитик

Привет. Спасибо за обновление и ответы на мои вопросы. Уже задано много замечательных вопросов, так что у меня есть пара быстрых. Итак, во-первых, по AXS-05 для лечения MDD, какая часть целевой группы лиц, выписывающих рецепты, по вашему мнению, являются врачами первичного звена по сравнению с теми, кто занимается приемом питья? И ожидаете ли вы, что будет много назначений со стороны первичной медико-санитарной базы врачей, выписывающих лекарства?

Лори Энглберт — Старший вице-президент по коммерции и развитию бизнеса

Да.Привет, Дэвид. Спасибо за вопрос. Это действительно хорошо. Поэтому мы не склонны рассматривать это как сайт в сравнении с PCT. Мы склонны смотреть на это в первую очередь как на водный и / или как на высшую склонность к назначению. Я не категоризирую сайты или РСТ. Есть много PCT, которые ориентированы на психическое здоровье и фактически назначаются на том же уровне, что и некоторые из сайтов. Таким образом, наша нацеленность будет охватывать тех, кто выписывает рецепты, а также тех, кого мы считаем наиболее эффективными — с наилучшим потенциалом для выписывания рецептов.

Дэвид Хоанг — SMBC — Аналитик

Понял. Спасибо. Это действительно полезно. Что касается AXS-05 и AXS-07, есть ли какие-либо планы по коммерциализации этих продуктов за пределами США, в бывших США. географии самостоятельно или через партнера?

Лори Энглеберт — Старший вице-президент по коммерческому развитию и развитию бизнеса

Так что я тоже могу ответить на этот вопрос. Да, есть.Мы публично заявили, что ищем партнеров за пределами США, и эти обсуждения продолжаются.

Дэвид Хоанг — SMBC — Аналитик

Хорошо, спасибо. Это все для меня.

Оператор

Ваш следующий вопрос исходит от линии Роберта Хазлетта из BTIG. Пожалуйста продолжай. Ваша линия теперь открыта.

Стив Терри — BTIG — Аналитик

Привет. Это Терри на линии для Берта.Спасибо, что ответили на вопрос. Просто краткий вопрос о тесте AXS-05, посвященном агитации при болезни Альцгеймера. Стоит ли ожидать промежуточного анализа в какой-то момент? И если да, то что мы можем ожидать от данных об эффективности на этом этапе? И какие-нибудь цвета с точки зрения сроков потенциального промежуточного анализа? Спасибо.

Седрик О’Горман — Старший вице-президент по медицинским вопросам

В настоящее время есть — в настоящее время нет плана для промежуточного анализа этого исследования.Тем не менее, исследование составлено таким образом, чтобы на основе того, что мы видим с точки зрения частоты событий, можно было его включить. Таким образом, рандомизированные исследования абстиненции зависят от количества событий и, как правило, именно так они и работают. Итак, прямо сейчас, как мы упоминали в предыдущих замечаниях, еще слишком рано знать, какой будет ритм рецидивов. Никто раньше не проводил подобных исследований в области агитации при болезни Альцгеймера. Так что мы очень с нетерпением ждем возможности увидеть, как все закончится, но сейчас мы не планируем промежуточный анализ.

Стив Терри — BTIG — Аналитик

Хорошо, спасибо. Спасибо за это. А потом еще один на AXS-12. Не могли бы вы немного рассказать о возможных мыслях о конечных точках испытания, в том числе о сроках? Подойдет любой цвет.

Седрик О’Горман — Старший вице-президент по медицинским вопросам

Итак, для AXS-12 основной конечной точкой исследования будет изменение частоты приступов катаплексии. Таким образом, это та же основная конечная точка, которую мы будем использовать в завершенном испытании Фазы 2 [Технический выпуск]

Стив Терри — BTIG — Аналитик

Хорошо, отлично.Спасибо за вопросы и поздравляю с прогрессом.

Седрик О’Горман — Старший вице-президент по медицинским вопросам

Спасибо.

Оператор

И ваш последний вопрос здесь исходит от линии Рама Селвараджу из H.C. Уэйнрайт. Пожалуйста продолжай. Ваша линия теперь открыта. И снова Рам Сельвараджу из H.C. Уэйнрайт, ответьте, пожалуйста, на свой вопрос. Хорошо. И в очереди больше нет вопросов.Я передам звонок руководству для комментариев.

Эррио Табуто — Главный исполнительный директор

Что ж, еще раз спасибо всем за то, что присоединились к нашей телеконференции сегодня утром. Мы воодушевлены тем, что потенциально движемся к коммерциализации и продвигаем оставшуюся часть нашего конвейера на благо многих людей, живущих с серьезными заболеваниями ЦНС. Мы с нетерпением ждем возможности держать вас в курсе наших достижений в предстоящие месяцы.

Оператор

[Заключительные замечания оператора]

Продолжительность: 50 минут

Участники звонка:

Марк Якобсон — Главный операционный директор

Herriot Herriot — Tabute

Лори Энглеберт — Старший вице-президент по коммерции и развитию бизнеса

Ник Пиззи — Финансовый директор

Седрик О’Горман — Старший вице-президент по медицинским вопросам

Аманда Джонс — Старший вице-президент по клиническим разработкам

Чарльз Дункан — Кантор Фицджеральд — аналитик

Джун Ли — Руист — аналитик

— SVB Leerink — Аналитик

Vamil Divan — Mizuho Securities USA, LLC — Аналитик

Ятин Сунеха — Гуггенхайм — Аналитик

Джозеф Том — Коуэн — Аналитик

Крис Хауэртон — 9064 Аналитик

Мэтт Каплан — Ладенбург Тальманн — Аналитик

Майлз Минтер — Уильям Блэр — аналитик

Дэвид Хоанг — SMBC — Аналитик